IL-23對(duì)小鼠黑色素瘤血管生成的影響.pdf

1、目前，關(guān)于慢性炎癥與腫瘤之間的關(guān)系已達(dá)成比較一致的認(rèn)識(shí)，慢性炎癥不僅作為一些腫瘤發(fā)生的土壤，而且在與腫瘤共同存在時(shí)，它還會(huì)作為一種促進(jìn)腫瘤發(fā)展的因素。慢性炎癥與腫瘤相關(guān)炎癥有許多相似之處，如固有免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)、基質(zhì)金屬蛋白酶活性升高、血管生成和微血管密度提高，從而，依賴(lài)腫瘤浸潤(rùn)性T細(xì)胞或內(nèi)皮淋巴細(xì)胞細(xì)胞毒性的免疫系統(tǒng)監(jiān)督功能增強(qiáng)，是早期抑制腫瘤發(fā)展的關(guān)鍵。炎癥反應(yīng)過(guò)程如血管生成和巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)是細(xì)菌感染的有效防御機(jī)制，但是這

2、個(gè)調(diào)節(jié)通路似乎對(duì)于腫瘤的預(yù)防并不合適，反而為腫瘤提供了一個(gè)保護(hù)性環(huán)境，其中細(xì)胞因子的表達(dá)不僅能幫助組織重建和血管生成，還能保護(hù)腫瘤免于免疫系統(tǒng)的抵抗。因此，慢性炎癥在與腫瘤共存環(huán)境中對(duì)其產(chǎn)生的作用，與炎癥部位細(xì)胞因子的釋放密切相關(guān)。本研究在實(shí)驗(yàn)室前期建立慢性炎癥黑色素瘤復(fù)合動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上，對(duì)小鼠血清中部分腫瘤發(fā)展相關(guān)細(xì)胞因子的含量進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)合對(duì)腫瘤組織中微血管的計(jì)數(shù)，分析白細(xì)胞介素(IL)-6、IL-17、IL-23、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)

3、因子(VEGF)與腫瘤組織中微血管密度(MVD)的相關(guān)性，并選取炎癥因子IL-23進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，觀察其對(duì)B16F10細(xì)胞增殖、遷移、侵襲以及血管生成擬態(tài)能力的影響，主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　 第一部分:小鼠血清中部分腫瘤發(fā)展相關(guān)細(xì)胞因子含量的檢測(cè)與分析
　　 本部分研究選取小鼠血清（取自實(shí)驗(yàn)室前期建立的慢性炎癥-黑色素瘤復(fù)合動(dòng)物模型）作為檢測(cè)對(duì)象，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)對(duì)其中部分細(xì)胞因子進(jìn)行檢測(cè)與分析，結(jié)合前期

4、實(shí)驗(yàn)中對(duì)腫瘤組織進(jìn)行的微血管計(jì)數(shù)進(jìn)行了相關(guān)性分析。
　　 得出結(jié)果如下:炎癥腫瘤組小鼠血清白細(xì)胞介素（IL）-6、IL-17、IL-23、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)均明顯大于單純腫瘤組(P＜0.05)。炎癥腫瘤組小鼠血清中IL-6、IL-17、IL-23、VEGF水平均與MVD呈正相關(guān)(P＜0.05或P＜0.01)。且炎癥腫瘤組組小鼠血清中IL-17、IL-23水平與VEGF呈正相關(guān)(P＜0.01)，IL-6與VEGF無(wú)相

5、關(guān)性(P＞0.05)。
　　 根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合關(guān)于上述三種白介素類(lèi)炎癥因子與腫瘤發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究現(xiàn)狀。目前達(dá)成的共識(shí)為:IL-23可以通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體免疫功能產(chǎn)生IFN-γ、TNF-α等發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng);IL-23通過(guò)調(diào)節(jié)免疫監(jiān)視等功能，對(duì)腫瘤微環(huán)境中的免疫系統(tǒng)進(jìn)行編輯，打破機(jī)體平衡狀態(tài)，起到誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生的作用。而關(guān)于IL-23與腫瘤血管生成方面的研究關(guān)注度相對(duì)不夠，因此，本研究選取IL-23作為下一步體外實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象。

6、r>　　 第二部分:IL-23對(duì)小鼠黑色素瘤細(xì)胞體外增殖、遷移、侵襲以及管道形成能力的影響
　　 為了進(jìn)一步觀察單一炎癥因子對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲以及管道形成能力的影響，本部分選擇IL-23和小鼠來(lái)源的黑色素瘤B16F10細(xì)胞進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)研究，通過(guò)培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞，施加IL-23進(jìn)行作用，觀察其對(duì)B16F10細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及管道形成能力產(chǎn)生的影響。
　　 四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:IL-23干預(yù)

7、組腫瘤細(xì)胞增殖率高于對(duì)照組，OD值差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明IL-23可促進(jìn)小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞的生長(zhǎng)。且給予IL-23處理時(shí)，黑色素瘤細(xì)胞伸出細(xì)長(zhǎng)的偽足，表現(xiàn)出與對(duì)照組不同的形態(tài)。
　　 劃痕實(shí)驗(yàn)顯示，加入不同濃度IL-23后，小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞向劃痕中央遷移的距離明顯大于正常對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，加入IL-23組的小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞穿

8、膜數(shù)明顯多于正常對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 明膠酶譜實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，加入IL-23后小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9表達(dá)活性增強(qiáng)（P＜0.05）。
　　 三維管道形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，加入IL-23后小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞形成管道能力明顯增強(qiáng)。
　　 Western blot結(jié)果顯示加入IL-23后小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞的NF-κB表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05);
　　

9、 綜上所述，本研究通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)實(shí)驗(yàn)，對(duì)動(dòng)物模型中小鼠血清細(xì)胞因子進(jìn)行檢測(cè)和分析，尋找細(xì)胞因子濃度與腫瘤微血管密度之間的關(guān)聯(lián)性，并選擇炎癥因子白細(xì)胞介素-23進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，運(yùn)用MTT試驗(yàn)、劃痕試驗(yàn)Transwell侵襲試驗(yàn)、明膠酶譜分析、三維培養(yǎng)等技術(shù)，觀察IL-23對(duì)小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲以及管道形成能力的影響，得出以下結(jié)論:
　　 1、慢性炎癥與惡性黑色素瘤共存動(dòng)物模型中，部分白細(xì)胞介素類(lèi)炎癥因子的

10、釋放能夠促進(jìn)黑色素瘤內(nèi)皮血管的生長(zhǎng):分析細(xì)胞因子的含量與腫瘤微血管密度的結(jié)果表明，IL-17、IL-23、VEGF的含量均與MVD呈正相關(guān)，且IL-17、IL-23與VEGF呈正相關(guān)，說(shuō)明IL-17和IL-23很可能會(huì)通過(guò)促進(jìn)VEGF的分泌，繼而促進(jìn)內(nèi)皮血管的生成。
　　 2、白細(xì)胞介素-23對(duì)小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞擬態(tài)血管形成的影響:通過(guò)MTT試驗(yàn)、劃痕試驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)、三維培養(yǎng)試驗(yàn)以及明膠酶譜分析，結(jié)果