COX-2反義寡核苷酸抑制宮頸癌Hela細(xì)胞的研究.pdf

1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文COX2反義寡核苷酸抑制宮頸癌Hela細(xì)胞的研究姓名：李淞漪申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：帥茨霞20050501溫川醫(yī)學(xué)院壩Ij學(xué)位論史COX2反義寡核苷酸抑制宮頸癌Hela細(xì)胞的研究摘要(00文1目的：通過研究壞氧合酶一2(COX2)反義寡核苷酸對宮頸癌Hela細(xì)胞的抑制作用，從COX一2mRNA和COX一2蛋白表達(dá)及細(xì)胞周期的再分布I方面對其抑制原理進(jìn)行分析，柬探討COX2反義寡核苷酸對宮頸癌的治療

2、意義。方法：Hela細(xì)胞用MEM培養(yǎng)基體外培養(yǎng)，并用顯微鏡對其生長狀態(tài)進(jìn)行觀察。設(shè)計并合成COX一2特異性的反義寡核苷酸。將Hela細(xì)胞分為6組：(A)l卜常對照組：不行干預(yù)措施：(B)『F義寡核苷酸(S—ODNs)f預(yù)組：轉(zhuǎn)染正義COX2核苷酸：(C)空脂質(zhì)體干預(yù)組：用脂質(zhì)體處理。(D1)反義寡核苷酸(AS—ODNs)干預(yù)組1：轉(zhuǎn)染COX一2反義寡核苷酸至濃度5umol／1；(D2)反義寡核苷酸下預(yù)組2：轉(zhuǎn)染COX2ASODNs至濃度

3、10umol／l；(D3)反義寡核苷酸干預(yù)組3：轉(zhuǎn)染COX一2AS—ODNs至濃度15umol／1；(1)對6組Hela細(xì)胞處理后培養(yǎng)l20小時，分別在轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h、96h、120h用MTrl法檢測不同組細(xì)胞的增殖情況；(2)在轉(zhuǎn)染后48h檢測COX2mRNA的表達(dá)水平：用Westernblot檢測各組COX一2蛋白的表達(dá)；采用流式細(xì)胞儀測定COX2蛋白的表達(dá)量；(3)轉(zhuǎn)染后48h用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞周期的變化。結(jié)果：l

4、、ASODNs轉(zhuǎn)染的細(xì)胞增長緩慢，見大量細(xì)胞碎片，與對照組1日比，活細(xì)胞數(shù)顯著減少。AS—ODNs抑制效果與作用時問有關(guān)，轉(zhuǎn)染后48—72小時抑制效果最強(qiáng)，如果不行AS—ODNs補(bǔ)充，120小時抑制效果基本消失。2、RTPCR結(jié)果顯示AS—ODNs組COX一2mRNA表達(dá)明顯剛目，其表達(dá)鼠與AS—ODNs作用的濃度有關(guān)系，15umol／1時抑制效果明顯強(qiáng)丁10mol／1及5Ixtool／1的AS—ODNs作用濃度。3、Westernbl