吸煙對雄性大鼠生殖毒性的機制研究.pdf

1、目的：研究吸煙對大鼠下丘腦-垂體-睪丸軸相關激素的影響及對睪丸細胞的毒性作用，通過對相關凋亡基因研究分析其可能的機制；研究香煙煙霧提取物對睪丸細胞的細胞毒性，分析其可能機制。
　　方法：體內實驗方法，選用5周SD大鼠80只，分為對照組與吸煙組，吸煙組采用靜式染毒，每天1次，每次2h，連續(xù)8周；對照組采用空白對照。實驗第2周、第4周、第6周與第8周分別處死對照組與吸煙組大鼠10只，測定各種指標。放射免疫法測定血清中睪酮、黃體生成激素

2、、卵泡雌激素、胰島素樣生長因子-1及下丘腦促性腺激素釋放激素；HE染色觀察睪丸的結構形態(tài)；TUNEL法定性、定量測定睪丸的細胞凋亡；Western Blot檢測各組大鼠睪丸組織中Fas/FasL與Bcl-2/Bax蛋白表達；RT-PCR檢測各組大鼠睪丸組織中Fas/FasL與Bcl-2/BaxmRNA表達。用細胞培養(yǎng)研究香煙煙霧提取物對大鼠睪丸的支持細胞、間質細胞與生精細胞的影響。取對數(shù)生長期細胞用于試驗，三種睪丸細胞培養(yǎng)，按照CSE干

3、預濃度不同，將試驗分為三組：0％CSE組、5%CSE組、10%CSE組。各組細胞培養(yǎng)12h后，采用MTT法檢測CSE對細胞增殖的影響，流式細胞術檢測細胞凋亡的情況，生物化學的方法檢檢測胞外乳酸脫氫酶的改變。
　　結果：1）隨著時間延長，吸煙組大鼠體重明顯低于對照（P＜0.05）；2）大鼠血清中睪酮含量自第四周起吸煙組明顯低于對照組（P＜0.05）；吸煙組大鼠血清T含量隨染毒時間延長明顯下降（P＜0.05）；3）大鼠血清中黃體生成素

4、含量在對照組有隨著時間延長逐漸增高，在吸煙組則隨時間下降；第四周起吸煙組大鼠血清中黃體生成素含量明顯低于對照組（P＜0.05）；4）大鼠血清中卵泡刺激素在對照組與吸煙組含量穩(wěn)定，自第二周起吸煙組含量明顯低于對照組（P＜0.05）；5）大鼠血清中胰島素樣生長因子-1含量隨時間下降，吸煙組大鼠血清中胰島素樣生長因子-1在第八周含量明顯低于第二周、第四周與第六周（P＜0.05），吸煙組第二周、第六周和第八周均明顯低于對照組（P＜0.05）；6

5、）大鼠下丘腦促性腺激素釋放激素無論是對照組還是吸煙組隨時間延長而升高，吸煙組與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；7）睪丸HE染色發(fā)現(xiàn)吸煙可以導致睪丸結構組織的破壞，隨著時間的延長，組織改變明顯加深。第八周組吸煙組睪丸組織出現(xiàn)明顯的萎縮，大量的細胞裂解，細精管與間質組織出現(xiàn)明顯的變性改變；8）TUNEL法測定睪丸細胞的凋亡率，吸煙組第四周、第六周、第八周細胞凋亡率明顯增高（P＜0.05）；9）吸煙組大鼠睪丸組織中Fas/FasL

6、與Bax蛋白上調，Bcl-2蛋白下調；Fas/FasL、Bax基因的mRNA表達水平有上調的趨勢，結果與蛋白表達相同。吸煙第八周大鼠睪丸的Fas/FasL、Bax基因表達水平明顯上升（P＜0.05），Bcl-2mRNA下調明顯（P＜0.05）10）香煙煙霧提取物對支持細胞增值的影響沒有顯著性差異（P＞0.05）；對間質細胞、生精細胞增值隨濃度的升高出現(xiàn)明顯的下降（P＜0.05），且呈現(xiàn)一定的劑量反應關系；香煙煙霧提取物組的睪丸支持細胞、

7、間質細胞和生精細胞組胞外LDH活力明顯高于對照組（P＜0.05）；11）流式細胞儀測定結果表明CSE導致支持細胞、間質細胞和生精細胞組胞凋亡率上升。
　　結論：吸煙是青春期大鼠生殖系統(tǒng)發(fā)育的有害因素，不僅下丘腦-垂體-睪丸軸中重要的激素有影響，而且對睪丸組織與細胞有不利影響，其可能的機制是吸煙激活了細胞凋亡調控基因，導致相應蛋白表達增加，同時抑制了保護性蛋白的表達；香煙煙霧提取物中含有導致睪丸支持細胞、間質細胞和生精細胞凋亡的化學