DADS對人小細胞肺癌細胞株NCI-H446增殖和凋亡的影響.pdf

1、研究目的：
　　探討二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)體外抑制人肺癌細胞株NCI-H446細胞增殖作用、誘導凋亡作用及可能的分子機理。
　　研究方法：
　　(1)采用MTT、細胞計數(shù)、細胞活力檢測DADS對體外培養(yǎng)的人肺癌 H446細胞的抑制增殖作用;
　　(2)倒置顯微鏡,普通光學顯微鏡,熒光顯微鏡觀察DADS對體外培養(yǎng)的人肺癌 H446細胞的形態(tài)學改變;
　　(3)DNA瓊脂糖

2、凝膠電泳實驗觀察凋亡條帶;
　　(4)流式細胞儀檢測DADS對H446細胞的細胞周期阻滯作用和細胞凋亡率的影響;
　　(5)激光共聚焦顯微鏡檢測DADS對 H446細胞內(nèi)Ca2+變化的影響;
　　(6)利用免疫組織化學(S-P法)檢測用藥前后H446細胞內(nèi)Bcl-2和PCNA蛋白表達的變化,初步探討DADS在體外對人肺癌H446細胞誘導凋亡作用的可能機制。
　　結(jié)果：
　　(1)MTT結(jié)果顯示:DADS作用

3、 H446細胞后,明顯抑制細胞增殖且抑制率呈現(xiàn)濃度和時間依賴性關(guān)系;細胞計數(shù)結(jié)果表明:DADS作用 H446細胞后呈濃度依賴性延長細胞群體倍增時間。
　　(2)形態(tài)學觀察結(jié)果顯示:DADS處理H446細胞后,作用早期細胞即可出現(xiàn)凋亡形態(tài)學變化。
　　(3)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示:DADS可誘導H446細胞產(chǎn)生凋亡細胞的典型梯狀條帶。
　　(4)流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示:DADS處理H446細胞后Go/G1期細胞比例下降,

4、而G2/M期細胞比例則顯著增加;藥物誘導組細胞凋亡率明顯高于非誘導組。
　　(5)激光共聚焦結(jié)果顯示:DADS處理H446細胞后,處理組熒光強度明顯高于未處理組,提示DADS促進細胞內(nèi)Ca2+水平升高。
　　(6)免疫組織化學結(jié)果顯示:DADS處理細胞48h后,BCL-2表達減弱,PCNA蛋白表達下調(diào)。
　　結(jié)論：
　　1.DADS對人小細胞肺癌H446細胞株具有抗增殖作用,且與藥物濃度及作用時間相關(guān)。