腦源性神經生長因子在唾液腺腺樣囊性癌神經侵襲和轉移中作用的相關研究.pdf

1、目的： 以SACC臨床標本和SACC細胞系ACC-2及其肺高轉移株ACC-M作為研究腫瘤轉移分子機制的模型，旨在通過一系列體外、體內實驗觀察腦源性神經生長因子(BDNF)與SACC神經侵襲特性的關系以及BDNF對SACC抗失巢凋亡能力、增殖能力、體內轉移能力的影響。 方法： 1.以30例SACC標本為研究對象，以5例正常腮腺及3例腺泡細胞癌作為對照，采用免疫組化法對BDNF和TrkB進行檢測。以SACC高低轉移細

2、胞系ACC-2和ACC-M為研究對象，利用免疫組化、RT-PCR、實時熒光定量PCR和Western印跡檢測BDNF和TrkB在其中的表達差異。 2.以唾液腺腺樣囊性癌(SACC)高低轉移細胞系ACC-Metastasis(ACC-M)和ACC-2為研究對象，利用MTT、懸浮培養(yǎng)、流式細胞儀、軟瓊脂克隆形成實驗觀察BDNF對SACC抗失巢凋亡能力、增殖能力和體外侵襲能力的影響。 3.以唾液腺腺樣囊性癌(SACC)高低轉移

3、細胞系ACC-Metastasis(ACC-M)和ACC-2為研究對象，利用裸鼠建立涎腺腺樣囊性癌體內轉移模型，觀察BDNF在涎腺腺樣囊性癌轉移過程中的作用。 結果： 1.組織標本免疫組化顯示TrkB表達水平在嗜神經現象組顯著高于未見嗜神經現象組(P<0.05)，BDNF表達水平與嗜神經現象無關(P>0.05)。實時熒光定量PCR和Western印跡均檢測到BDNF和TrkB在ACC-M中的表達高于ACC-2(P<0.0

4、1)。 2.ACC-2和ACC-M在體外培養(yǎng)過程中均具有一定的抗失巢凋亡能力，且ACC-M高于ACC-2(P<0.01)。25ng/ml，50ng/ml，100ng/mlBDNF對ACC-2和ACC-M增值均無明顯影響(P>0.05)。50ng/ml BDNF可以明顯提高ACC-2的抗失巢凋亡能力(P<0.01)和克隆形成(P<0.01)。50ng/ml BDNF可以明顯提高ACC-2和ACC-M的體外侵襲能力(P<0.01)

5、 3.ACC-M裸鼠體內轉移能力顯著高于ACC-2的裸鼠體內轉移能力，ACC-2和ACC-M在轉移能力上存在差異。實驗組(ACC-2+100ng/ml BDNF)與對照組(ACC-2)相比較，雖然在成瘤面積和所占比例上略高，但其差異不具有統(tǒng)計學意義。 結論： 1.TrkB的表達強度與SACC的神經侵襲特性相關。BDNF和TrkB的表達強度與SACC的高轉移特性相關。 2.SACC的轉移特性與抗失巢凋亡能力相