水稻苯達(dá)松抗性基因Bel的精細(xì)定位與克隆.pdf

1、本文通過7356株F<,2>代單株，篩選到1776株對(duì)苯達(dá)松敏感的植株。利用這些敏感植株對(duì)苯達(dá)松抗性基因Bel進(jìn)行精細(xì)定位，最終將Bel基因定位在兩個(gè)RFLP標(biāo)記L5和P17之間一個(gè)36kb的區(qū)域內(nèi)。序列分析表明，這個(gè)區(qū)域共有5個(gè)可能的候選基因，它們分別是乙烯反應(yīng)基因OsER33和四個(gè)重復(fù)的P450相關(guān)基因CYP81A5、CYP81A6、CYP81A7和CYP81A8。通過重組分析，發(fā)現(xiàn)RFP標(biāo)記P17位于候選基因CYP81A8的編碼區(qū)

2、域且與Bel基因之間有一個(gè)重組單株，因此，剔除了CYP81A8這個(gè)候選基因。在野生型和突變體之間對(duì)這四個(gè)候選基因進(jìn)行比較測(cè)序，在候選基因ER33、CYP81A5和CYP81A7的編碼區(qū)域內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)任何差異，但在候選基因CYP81A6的編碼區(qū)域發(fā)現(xiàn)了一個(gè)單堿基G的缺失，對(duì)CYP81A6進(jìn)行全長cDNA分析，發(fā)現(xiàn)這個(gè)單堿基G的缺失發(fā)生在CYP81A6起始密碼子下游1332bp的地方。這個(gè)G的缺失使候選基因CYP81A6的編碼區(qū)域發(fā)生了移碼突