湖南家蠶微粒子病的病原體研究.pdf

1、本論文主要從湖南家蠶微粒子病病原體來源、病原性研究、超微結(jié)構(gòu)、SSU-rDNA基因序列四個方面入手，試圖探明危害我省蠶種生產(chǎn)的主要病原性微孢子蟲的確切來源、生物學(xué)特征、致病機(jī)理以及該病原與高致病型家蠶微孢子蟲(Nosema bombycis,N.b)間差異，并為科學(xué)鑒別家蠶新型病原微孢子蟲以及系統(tǒng)地防治家蠶微粒子病提供理論依據(jù)。本論文研究成果主要有： 1、研究證實我省微粒子病病原主要來源于桑園昆蟲，其中最主要的病原為菜粉蝶微孢子

2、蟲(簡稱CFD)和桑尺蠖微孢子蟲(簡稱SCH)。 通過對野外桑園昆蟲的連續(xù)三年抽查檢毒、桑葉浸洗消毒的對比實驗，以及湖南省蠶種生產(chǎn)中發(fā)生的微孢子蟲與各類昆蟲微孢子蟲在顯微鏡下的形態(tài)比較，證實湖南省蠶種生產(chǎn)上發(fā)生的微孢子蟲與昆蟲微孢子蟲交叉感染極其相關(guān)。研究揭示出的昆蟲微孢子蟲發(fā)生率與蠶種毒率成正相關(guān)關(guān)系，為進(jìn)一步防治家蠶微粒子病而進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測和建立預(yù)警機(jī)制具有重要的借鑒作用。 2、對兩種主要桑園害蟲來源微孢子蟲CFD和S

3、CH及與家蠶高致病微孢子蟲N.b展開了系統(tǒng)的病原性研究，結(jié)果證實該兩種昆蟲來源的微孢子蟲對家蠶感染力非常強(qiáng)，且都具有弱胚傳性。兩者無論是原代孢子還是繼代孢子感染家蠶后其病程都較長，病征不明顯，發(fā)病極其緩慢，對飼養(yǎng)和制種成績基本沒有影響，因此與N.b存在顯著差異，初步判斷為異型孢子。 研究中還發(fā)現(xiàn)CFD、SCH能否成為胚種帶毒種與患病母蛾體內(nèi)的微孢子蟲密度沒有太大的相關(guān)性。 3、通過解剖感染CFD和SCH微孢子蟲的家蠶各種

4、組織，并進(jìn)行顯微鏡鏡檢，發(fā)現(xiàn)在蠶的中腸、絲腺、馬氏管、脂肪等組織中均能檢出微孢子蟲，說明該兩種孢子蟲可全面寄生于家蠶，與N.b一樣屬全身性寄生病原。 4、通過對CFD孢子蟲的P、F1、F2做電鏡掃描觀察，發(fā)現(xiàn)其長短徑比例及大小有變化趨勢，并且隨繼代進(jìn)行，孢子個體間形態(tài)及大小差異明顯減少，群體趨于整齊一致，并向長短徑比例縮小、孢子呈現(xiàn)飽滿的方向發(fā)展，與N.b的形態(tài)差別逐漸減少。而SCH比較穩(wěn)定，經(jīng)家蠶繼代后長短徑體積有變小趨勢且更

5、接近于N.b。似乎說明家蠶的N.b最初來源于桑園昆蟲。 5、用電鏡透射掃描觀察，CFD與SCH兩者結(jié)構(gòu)非常相似，孢子壁由三層組成，極體分為前后兩部分，極絲同型，極絲切面為五層同心圓結(jié)構(gòu)，核成對出現(xiàn)，核形不規(guī)則，核膜雙層；粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)附含大量的核糖體，孢子后部有后極泡，其周圍可見液泡，超微結(jié)構(gòu)這種特征均符合Nosema屬的描述。因此，CFD和SCH微孢子蟲均應(yīng)為Nosema屬。 6、通過設(shè)計不同的引物，對孢子蟲的DNA模板進(jìn)

6、行了PCR擴(kuò)增，獲得核糖體小亞基RNA基因(SSU-rDNA)的部分基因序列并進(jìn)行了分子生物學(xué)的鑒別與進(jìn)化分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)菜粉蝶孢子蟲(CFD)的SSIJ-rDNA基因部分序列片段的總長度為1128bp、桑尺蠖微孢子蟲(SCH)SSU-rDNA基因部分序列片段的總長度為1133bp，兩者與N.b在基因水平上都存在一定差異，表明兩者都與N.b同屬不同種。家蠶孢子蟲(廣東株)與兩種昆蟲來源的孢子蟲在樹型圖上相距較遠(yuǎn)，而菜粉蝶和桑尺蠖相距較近，