蘋果MdHB1基因啟動(dòng)子的克隆及特征分析.pdf

1、MdHB1是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，屬于蘋果HD-ZipI亞家族的成員，根據(jù)先前的報(bào)道，MdHB1能夠與MdACO1啟動(dòng)子結(jié)合，進(jìn)而調(diào)控乙烯生物合成。本試驗(yàn)以‘皇家嘎啦’葉片為試材，克隆MdHB1基因啟動(dòng)子，然后以煙草為材料，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化技術(shù)來(lái)探究蘋果MdHB1基因啟動(dòng)子的特性。本試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1、克隆了長(zhǎng)度為1057bp的MdHB1基因啟動(dòng)子，利用生物信息學(xué)軟件對(duì)MdHB1基因啟動(dòng)子進(jìn)行轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)和順式作用元件的分析，

2、結(jié)果顯示轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)(TSS)、CAAT BOX、TATA BOX分別位于翻譯起始位點(diǎn)(ATG)上游266bp、319bp、308bp的位置。在這一段基因啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)存在響應(yīng)激素和環(huán)境因素的順式作用元件，如ERE、ABRE、ARE、G-Box等。
　　2、啟動(dòng)子5，端序列缺失試驗(yàn)表明，當(dāng)啟動(dòng)子長(zhǎng)度為680bp時(shí)，活性最低，當(dāng)啟動(dòng)子長(zhǎng)度為266bp時(shí)，仍具有較高的啟動(dòng)子活性。5'UTR（非編碼區(qū)域）在基因表達(dá)過(guò)程中可能起到一個(gè)積極的

3、作用。
　　3、通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化技術(shù)，獲得含有長(zhǎng)度為1057bp啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)基因煙草，在生物和非生物因素的處理下，啟動(dòng)子受到乙烯、黑暗的正調(diào)控作用，而脫落酸(ABA)、水楊酸(SA)、假單胞丁香桿菌(DC3000)和機(jī)械傷對(duì)啟動(dòng)子的正調(diào)控作用較微弱，赤霉素(GA)則抑制啟動(dòng)子的活性。
　　4、乙烯響應(yīng)元件(距ATG上游576bp)能夠響應(yīng)外源乙烯正調(diào)控作用，當(dāng)外源乙烯處理濃度逐漸增大時(shí)，正調(diào)控效應(yīng)逐漸升高達(dá)到最大值，然