EB病毒Zta-P54蛋白在大腸桿菌中的表達、純化及檢測方法的初步探索.pdf_第1頁
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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniVers時forthedegreeofMasterExpression,PurificationofZta—P54FusionProteininEscherichiacoliofEpstein—BallrVirusAndresearchThedetectionmethodsByChunyanZhangSuperVisor:Prof1YPunlongW

2、angBiochemist巧andMolecularBiologyC01legeoflifesciencesMay2014摘要摘要EB病毒與鼻咽癌的發(fā)生密切相關,該病毒以環(huán)狀DNA的形式整合在宿主細胞染色體上。由于鼻咽位置較深,早期病變在臨床常規(guī)體檢中不容易被發(fā)現(xiàn),且CT等影像學診斷很難區(qū)分早期鼻咽癌與其它鼻咽增生性病變。因此,創(chuàng)傷小、成本低、檢測速度快的血清學診斷方法是目前鼻咽癌早期診斷研究的熱點和難點。鑒于此我們擬通過表達鼻咽癌BZ

3、LFlBMⅪ71融合基因的蛋白抗原來建立檢測病人血清中EB病毒相關抗體,為鼻咽癌的早期診斷及廣譜篩查提供技術手段。本研究根據(jù)本實驗室pGEx5TBZLFlBMI強1質(zhì)粒的測序結果,利用premer50設計引物,從已有EB病毒抗原基因序列的質(zhì)粒上,通過PCR方法擴增獲得目的基因片段,與載體pET32a連接,構建重組質(zhì)粒pET32a/BZLFlBMI江1,在大腸桿菌BL21(DE3)中表達,經(jīng)IPTG誘導,SDSPAGE分析蛋白可溶性、We

4、stenlblot檢測所表達蛋白的免疫原性,并通過優(yōu)化的硫酸銨沉淀、離子交換層析和親和層析對重組蛋白進行純化。辣根過氧化物酶標記純化的ZtaP54融合蛋白,利用棋盤法確定重組抗原包被和酶標抗體工作濃度,初步建立新的鼻咽癌診斷及篩查ELIsA方法,對其進行特異性、精密性和臨床分析。結果表明:1)成功構建重組質(zhì)粒pET32彩BzLFlBMI江1實現(xiàn)了ZtaP54融合蛋白的可溶性表達;2)建立了該抗原的優(yōu)化純化程序,純度可達965%;3)利用

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