中藥復方對人眼球后成纖維細胞Th1-Th2細胞因子失衡的影響.pdf

1、背景：甲狀腺相關性眼病(thyroid associated ophthal—mopathy，TAO)又名Graves眼病(Graves’ophthalmopathy，GO)是一種器官特異性自身免疫性疾病[1]。其癥狀表現(xiàn)為甲狀腺腫大、眼球突出、高代謝綜合征，脛前粘液性水腫等。有研究表明，TAO是一種器官特異性的自身免疫性疾病，為細胞及體液免疫在遺傳和環(huán)境等因素條件下同時作用的結果[2]。TAO主要的病理變化為眼眶后結締組織和眼外肌的免

2、疫炎性反應，其發(fā)病涉及多種因素。因此，TAO已成為內(nèi)分泌疾病中一個研究的重要課題，本實驗從Th1/Th2細胞因子的角度將其與中醫(yī)辨證分型結合在一起，尋找積極有效的治療 TA O的新方法，為TA O在中醫(yī)上的治療提供依據(jù)。
　　目的：本研究在前期臨床和實驗有效基礎上，從拮抗 Th1細胞因子 IFN-γ和Th2細胞因子 IL-4對RFs生物學活性影響，調(diào)節(jié)Th1/Th2失衡方面，探討瀉火平突散、活血平突散、養(yǎng)目平突散治療 TAO的機制

3、。以及觀察三種中藥復方對IFN-γ、IL-4刺激后 RFs增殖的影響和對 IFN-γ、IL-4刺激后 HA和I、Ⅲ型膠原及 MMPs、TIMPs等細胞外基質(zhì)合成的影響。
　　方法：
　　1.原代培養(yǎng)RFs并進行鑒定。眼球后結締組織取眼外傷或其他眼部手術病人，實驗所用細胞在2-8代間。采用倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)及免疫細胞化學染色法其鑒定。
　　2.RFs與三種中藥復方含藥血清的不同劑量（10％，20%，30%）一起孵

4、育48小時后，MTT比色法檢測，確定最佳劑量。
　　3.RFs與 IFN-γ、IL-4及含藥血清刺激后 MTT比色法檢測中藥血清對 RFs活力影響。
　　4.RFs與IFN-γ(200U/mL)、IL-4(200U/mL)以及三種含藥血清共同孵育48小時后Elisa法檢測IFN-γ、IL-4對HA和Ⅰ、Ⅲ型膠原合成的影響。
　　5.RFs與IFN-γ(200U/mL)、IL-4(200U/mL)以及三種含藥血清共同孵育

5、48小時后，免疫細胞化學染色檢測 IFN-γ、IL-4和和三種含藥血清對 MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2表達的影響。
　　結果：
　　1.體外成功培養(yǎng)正常人眼眶后成纖維細胞，光鏡下觀察從組織塊四周長出的細胞，呈放射狀，細胞形狀為梭形和大多角形，10-14天細胞逐漸生長融合成單層鋪滿培養(yǎng)瓶底。細胞鑒定結果顯示纖維原細胞的標記 vimentin為陽性，cytokeration為陰性，提示為純凈的RFs。

6、>　　2.中藥復方含藥血清對RFs有抑制作用，并在中劑量時最為明顯。
　　3.IFN-γ、IL-4刺激后對RFs有增殖作用，加入含藥血清后對RFs的增殖有抑制作用。
　　4. IFN-γ、IL-4能夠刺激HA和I、Ⅲ型膠原的合成和分泌，三種中藥復方含藥血清干預后HA和I、Ⅲ型膠原的表達均下降。
　　5. IFN-γ、IL-4刺激后MMPs、TIMPs細胞外基質(zhì)合成紊亂，中藥復方含藥血清干預后調(diào)節(jié)使其平衡。
　　結