EGFR-STAT3信號轉導通路在大鼠實驗性肝癌發(fā)生中的作用.pdf

1、背景和目的： 許多實體腫瘤中存在表皮生長因子受體(EGFR)或其配體轉化生長因子α(TGFQ)的高表達或異常表達。該通路的高活化在腫瘤細胞的增殖、細胞凋亡的抑制、血管生成、腫瘤侵襲及轉移等方面發(fā)揮重要作用。其可能機制為二者的高表達形成自分泌環(huán)，從而使下游信號傳導通路持續(xù)激活。 EGFR的下游分子信號轉導子及轉錄激活子3(STAT3)通常存在于細胞漿中，可發(fā)揮細胞信號轉導及基因轉錄激活雙重作用，當其705位酪氨酸被磷酸化后

2、，二聚化而轉入核內調節(jié)基因轉錄，從而調節(jié)細胞重要的生物學過程。在許多腫瘤如乳腺癌、頭頸部鱗狀細胞癌等中都發(fā)現(xiàn)STAT3持續(xù)活化，在促進增生及抑制凋亡中發(fā)揮十分重要的作用。但迄今為止還沒有發(fā)現(xiàn)持續(xù)活化的STAT3突變體。所以推測，上游信號傳導通路的異常激活，可能是STAT3持續(xù)活化的原因。對頭頸部鱗狀細胞癌及乳腺癌的研究表明，STAT3的持續(xù)活化與EGFR／TGFQ自分泌環(huán)的形成有關。 肝癌中對STAT3分子的表達及活化機制的研究

3、相對較少，本實驗中，通過致癌物3’一甲基一4一二甲基偶氮苯(3’Me-DAB)建立了肝癌動物模型，目的是探討和明確以下幾個問題：1)大鼠肝癌形成過程中EGFR、TGFα、STAT3的表達水平是否有變化及如何變化：2)肝癌中，STAT3在轉錄、表達及活化水平如何變化，是否存在STAT3的持續(xù)活化及其與上游EGFR通路的關系；3)該通路與肝癌細胞增殖間的關系；4)在肝癌中，STAT3下游分子Bcl一2、P21的表達。材料和方法： 1

4、．肝癌模型的制作：含有O．06％的3’Me—DAB純玉米粉喂養(yǎng)wistar大鼠12周，之后普通混合飼料喂養(yǎng)，誘發(fā)大鼠肝癌。 2．免疫組織化學法檢測EGFR、TGFα、STAT3在誘癌各階段的表達，P—STAT3、PCNA在肝癌及正常肝組織中的表達。 3．制備針對STAT3mRNA的DNA探針，原位雜交法檢測STAT3mRNA在肝癌及正常肝組織中的表達。 4．KS400圖像分析系統(tǒng)對免疫組織化學及原位雜交結果進行圖

5、像半定量分析。 5．蛋白印跡方法檢測STAT3、P—STAT3、Bcl一2、P21在肝癌及正常肝組織中的表達。 結果： 1．大鼠實驗性肝癌模型經(jīng)歷肝細胞變性壞死，肝細胞、卵圓細胞增生，成纖維細胞增生，肝硬化，肝癌形成的形態(tài)學變化。 2．EGFR、TGFQ、STAT3在誘癌早期肝細胞壞死和修復期表達有升高趨勢(p

6、STAT3、P—STAT3在肝癌中100％表達，與正常組織及癌周肝組織比較，肝癌中EGFR、TGFQ、P—STAT3表達顯著增強(p

7、果顯示肝癌中細胞增生水平明顯升高，且P-STAT3表達與PCNA的表達正相關(p

8、 2．EGFR、TGFQ、STAT3在肝癌誘癌各個時期有不同程度高表達，提示EGFR—STAT3信號轉導通路參與大鼠肝癌的形成。 3．肝癌中EGFR、TGFQ表達升高，STAT3轉錄、蛋白表達及活化水平均上調，提示大鼠實驗性肝癌中存在EGFR—STAT3通路的激活。 4．P—STAT3與腫瘤中TGFQ的表達呈正相關，與PCNA、Bcl-2的表達呈正相關，提示STAT3在肝癌中的持續(xù)活化是上游信號轉導通路EGFR—TGF