抑癌基因ADAMTS9在乳腺癌中的甲基化及其生物學功能研究.pdf

1、目的：
　　本研究通過在多株乳腺癌細胞和大量臨床乳腺癌樣本中檢測抑癌基因ADAMTS9的表達及甲基化狀態(tài)，分析其與臨床分期、分級之間的關系,闡明抑癌基因是否是具有臨床意義的表觀遺傳學標志物,從而為乳腺癌早期診斷和指導合理的“個體化治療”提供有價值的科學依據(jù)；通過對抑癌基因ADAMTS9的抑癌作用及機理的研究，為闡明乳腺癌癌變的機制奠定理論基礎。
　　方法：
　　1,利用RT-PCR方法檢測人體正常組織和胚胎組織以及乳腺

2、癌細胞株（BT549,MB231,MB468,MCF7,SK-BR-3,T47D，YCC-B1，YCC-B3）和正常乳腺組織中ADAMTS9的表達情況。
　　2，在線GOBO數(shù)據(jù)庫分析ADMATS9的表達與乳腺癌組織學分級、分期、受體的相關性。
　　3，采用MSP和BGS方法檢測基因ADAMTS9在乳腺癌細胞株及乳腺癌組織、癌邊緣組織和正常組織中的甲基化情況并分析其啟動子甲基化情況與乳腺癌臨床病理相關性。
　　4，利用

3、去甲基化藥物處理誘導乳腺癌細胞,以證實ADAMTS9表達缺失是因啟動子甲基化直接所致并分析其啟動子甲基化情況與乳腺癌臨床病理相關性。
　　5，將ADAMTS9轉染乳腺癌細胞株BT549，通過克隆形成實驗、CCK8、Transwell遷移侵襲實驗、流式細胞儀技術分析基因的表達對乳腺癌細胞生長、遷移能力、凋亡、周期及血管形成的影響
　　結果：
　　1,ADAMTS9廣泛表達于人體各個組織器官，包括正常乳腺組織，在乳腺癌細胞

4、株中表達顯著減弱或缺失,啟動子頻繁發(fā)生甲基化改變。
　　2,GOBO數(shù)據(jù)庫顯示ADAMTS9在Normal-like乳腺癌分型中的表達最高,而在Lumb型乳腺癌中的表達最低。在雌激素受體（Estrogenreceptor,ER）陽性的乳腺癌組中，ADAMTS9的表達低于雌激素受體陰性乳腺癌。同時，分析結果也顯示，在乳腺癌組織學分級中，ADAMTS9在Grade1中的表達最高，而在Grade3中表達最低。
　　3,Aza+TS

5、A處理ADAMTS9表達下調(diào)或缺失的乳腺癌細胞株，經(jīng)去甲基化處理后在乳腺癌細胞株重新表達。
　　4,ADAMTS9基因啟動子在93例乳腺癌組織有44例啟動子區(qū)存在甲基化，甲基化率為44％,而在癌旁及正常組織中沒有甲基化，統(tǒng)計分析顯示ADANTS9啟動子異常甲基化與乳腺癌HER2狀態(tài)存在相關性，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　5,在細胞株BT549中重新表達ADAMTS9可以顯著抑制乳腺癌細胞的生長遷移侵襲，促進其凋亡，且流式分析顯