Orexin-A能神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)丙泊酚麻醉-覺(jué)醒過(guò)程的作用研究.pdf

1、全麻藥物發(fā)現(xiàn)并使用至今已有160余年，然而其作用機(jī)制至今不明。由于揭示全麻藥物作用機(jī)制將對(duì)解答意識(shí)如何形成產(chǎn)生推動(dòng)，因此全麻機(jī)制研究也被列為神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域重要問(wèn)題。近年來(lái)，網(wǎng)絡(luò)調(diào)控學(xué)說(shuō)逐漸成為全麻藥物機(jī)制研究主流。然而，是何種神經(jīng)信號(hào)系統(tǒng)在麻醉-覺(jué)醒調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用尚不明確。前期我們研究發(fā)現(xiàn)，一種調(diào)節(jié)睡眠-覺(jué)醒的神經(jīng)系統(tǒng)---Orexin能神經(jīng)系統(tǒng)參與了吸入麻醉劑的覺(jué)醒調(diào)控。那么，這種新的神經(jīng)系統(tǒng)是否參與了經(jīng)典靜脈麻醉劑丙泊酚麻醉-覺(jué)醒

2、的調(diào)控呢？本課題針對(duì)這一問(wèn)題開(kāi)展了研究。
　　目的：評(píng)價(jià)Orexin能神經(jīng)系統(tǒng)在調(diào)節(jié)丙泊酚麻醉-覺(jué)醒過(guò)程中的作用。
　　方法：雄性SD大鼠48只，體重230～250g，月齡3～4月。
　　實(shí)驗(yàn)1：采用隨機(jī)數(shù)字表法，將30只大鼠隨機(jī)分為5組(n=6)：I組(未泵注丙泊酚)、II～V組分別經(jīng)頸靜脈輸注丙泊酚(60mg·kg-1·h-1)30min(II組)、60min(III組)、120min(IV組)，V組(麻醉藥物停止

3、輸注后覺(jué)醒即刻組)。各組收集股靜脈血樣，采用放射免疫法測(cè)定血漿Orexin-A濃度。隨后經(jīng)頸靜脈注射10％Kcl處死大鼠，取下丘腦采用免疫熒光染色法標(biāo)記Orexin能神經(jīng)元的活動(dòng)狀態(tài)，用c-Fos與Orexin-A共標(biāo)記確定Orexin神經(jīng)元處于活動(dòng)狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)2：另取18只大鼠隨機(jī)分為3組(n=6)：A組、B組和C組。采用2％戊巴比妥40-60mg/kg腹腔注射麻醉，應(yīng)用腦立體定位儀在前腦基底區(qū)(basalforebrain,BF)置入

4、微量注射管。待動(dòng)物恢復(fù)3-5d后，分別微注射乳酸林格氏液(A組)、Orexin-A30pmol(B組)、100pmol(C組)各0.3μl(注射時(shí)間5min)，注射結(jié)束后10min經(jīng)頸靜脈輸注丙泊酚(60mg·kg-1·h-1)麻醉，記錄大鼠翻正反射消失時(shí)間為麻醉誘導(dǎo)時(shí)間；次日，3組大鼠仍經(jīng)頸靜脈輸注丙泊酚(60mg·kg-1·h-1)麻醉，輸注15min時(shí)，于前腦基底區(qū)分別微注射各組相應(yīng)藥物(注射時(shí)間5min)，當(dāng)輸注30min時(shí)停止

5、輸注，記錄大鼠翻正反射恢復(fù)時(shí)間為麻醉覺(jué)醒時(shí)間，同時(shí)記錄大鼠整個(gè)麻醉覺(jué)醒過(guò)程中的腦電活動(dòng)。一周后，各組大鼠在BF區(qū)分別注射乳酸林格氏液(A組)、Orexin-A特異性拮抗劑SB-3348675μg(B組)、SB-33486720μg(C組)各0.3μl(注射時(shí)間5min)，以同樣的方法記錄大鼠誘導(dǎo)和覺(jué)醒時(shí)間。
　　結(jié)果
　　實(shí)驗(yàn)1：麻醉前(I組)大鼠下丘腦有較多的活動(dòng)性O(shè)rexin神經(jīng)元，占所有Orexin神經(jīng)元的(36.8±

6、1.0)％，但隨著丙泊酚輸注30，60min后，活動(dòng)的Orexin神經(jīng)元數(shù)量逐漸減少，分別占(7.3±0.4)％和(2.3±0.3)％，尤其在丙泊酚輸注120min時(shí)，鏡下未發(fā)現(xiàn)活動(dòng)的Orexin神經(jīng)元存在。但在V組麻醉覺(jué)醒時(shí)，活動(dòng)的Orexin神經(jīng)元數(shù)目有所增加，占(25.0±0.6)％。放射免疫檢測(cè)結(jié)果顯示，麻醉前(I組)大鼠血漿中Orexin含量為(24.96±0.64)pg/ml，但隨著丙泊酚輸注30min(II組)，60min

7、(III組)和120min(IV組)后，血漿Orexin-A濃度降低，分別為(19.25±0.56)pg/ml，(12.31±0.29)pg/ml，(12.33±0.45)pg/ml(P<0.05vsI組)。但V組麻醉覺(jué)醒時(shí)，血漿Orexin-A濃度升高(39.67±0.89)pg/ml(P<0.05vsI～I(xiàn)V組)。
　　實(shí)驗(yàn)2：Orexin-A大鼠前腦基底區(qū)微注射后，A組～C組麻醉誘導(dǎo)時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與A組比

8、較，C組麻醉覺(jué)醒時(shí)間明顯縮短(P<0.01)，但B組覺(jué)醒時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；B組和C組間麻醉覺(jué)醒時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。SB-334867大鼠前腦基底區(qū)微注射后，5μg和20μg均不影響麻醉誘導(dǎo)時(shí)間(P>0.05)；與A組比較，C組麻醉覺(jué)醒時(shí)間明顯延遲(P<0.01vsA組和B組)，B組與A組覺(jué)醒時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。腦電結(jié)果顯示，大鼠BF區(qū)微注射100pmol的Orexin-A后，可使麻醉狀態(tài)下的爆