人參皂甙單體Rb1和Rg1對(duì)小鼠睪丸支持細(xì)胞影響的比較.pdf

1、人參，又有“百草之王”之稱，在中國(guó)乃至世界，人參是應(yīng)用歷史最悠久、臨床價(jià)值最高的中草藥之一。人參皂甙單體Rbl(ginsenosideRbl,GRbl)和Rgl(ginsenosideRgl,GRgl)是人參皂甙的主要有效成分，它們具有多種功效，對(duì)于人體的多種器官、組織及細(xì)胞都具有重要的調(diào)控作用。本論文以原代培養(yǎng)的支持細(xì)胞為模型，比較了GRbl和GRgl對(duì)支持細(xì)胞(Sertolicell)的藥理作用，為進(jìn)一步研究它們藥理作用機(jī)制提供理論

2、基礎(chǔ)。 采用兩步酶消化法分離出生后3～7天的ICR小鼠睪丸支持細(xì)胞，用多次貼壁和多次離心法純化支持細(xì)胞，用中間纖維波形蛋白(vimentin)多克隆抗體和α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-actin)抗體進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)到所分離的支持細(xì)胞純度達(dá)到95％±1.2％。 首先利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)研究GRbl和GRgl分別對(duì)支持細(xì)胞增殖的影響。利用MTT比色法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)活力的影響，用S期BrdU標(biāo)記法檢測(cè)支持細(xì)胞的增殖。結(jié)果表

3、明GRbl能促進(jìn)支持細(xì)胞的存活和增殖，濃度為20μg/ml的GRb1對(duì)支持細(xì)胞的增殖最顯著；而GRg1對(duì)支持細(xì)胞的活力無(wú)明顯影響。 然后研究GRb1和GRg1分別對(duì)支持細(xì)胞GDNF表達(dá)的影響。用不同濃度的GRb1和GRg1處理支持細(xì)胞24小時(shí)后，進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)和免疫細(xì)胞化學(xué)分析，結(jié)果都表明GRb1能刺激支持細(xì)胞內(nèi)GDNFmRNA的表達(dá)，即GRb1促進(jìn)了支持細(xì)胞對(duì)GDNF的分泌，但GRb1濃度對(duì)支持細(xì)胞GDNF表達(dá)的影響不明

4、顯；而GRg1支持細(xì)胞內(nèi)GDNF的表達(dá)影響不顯著。 膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(glialcellline-derivedneurotrphicfactor,GDNF)是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforminggrowthfactorbeta,TGF-β)超家族的一個(gè)亞族，它的受體有GFRα1，c-Ret和NCAM，通過(guò)RT-PCR檢測(cè)和免疫細(xì)胞化學(xué)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)GDNF對(duì)支持細(xì)胞作用的信號(hào)通路是GDNF-GFRα1/NCAM。

5、 通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)GRg1對(duì)支持細(xì)胞的增殖及GDNF的表達(dá)都無(wú)明顯影響，GRb1能促進(jìn)支持細(xì)胞的增殖，而且它能明顯刺激支持細(xì)胞中GDNF分泌的增多，表明了GRb1促進(jìn)支持細(xì)胞增殖的藥理作用之一是通過(guò)GDNF-GFRα1/NCAM信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的。 本研究首次利用原代培養(yǎng)的小鼠睪丸的支持細(xì)胞為模型，觀察了GRb1和GRg1對(duì)支持細(xì)胞影響的藥理作用，為進(jìn)一步研究GRb1和GRg1的藥理作用的不同的分子機(jī)制及治療男性不育癥提供理論