蜂毒素通過調(diào)節(jié)HMGB1及其相關信號通路抑制人肝癌細胞生長的實驗研究.pdf

1、一、研究目的:
　　 1、觀察蜂毒素對肝癌細胞的生長抑制效應；
　　 2、觀察蜂毒素對肝癌細胞的周期阻滯效應；
　　 3、探索蜂毒素對肝癌細胞中HMGB1相關信號通路的影響。
　　 二、研究方法:
　　 1、通過MTT法，研究不同時間及濃度蜂毒素，對人肝癌細胞的生長抑制作用；
　　 2、通過流式細胞儀檢測蜂毒素誘導人肝癌細胞周期阻滯效應及其劑量關系；
　　 3、通過Westernb

2、lotting，檢測蜂毒素對人肝癌細胞中HMGB1、VEGF-C及VEGF-D蛋白表達的影響；
　　 4、通過qRT-PCR，檢測蜂毒素對人肝癌細胞中HMGB1、VEGF-C及VEGF-DmRNA表達的影響。
　　 三、研究結(jié)果:
　　 (一)MTT法觀察到蜂毒素對多種肝癌細胞(MHCC97H、QGY-7701、BEL-7402、HepG2、SMMC-7721)的生長具有抑制作用。當作用時間為24h，藥物濃度為4

3、μg/mL時，五種人肝癌細胞的存活率均小于60％，而藥物濃度為8μg/mL時，存活率均小于10％；當作用時間為48h、72h，藥物濃度為2μg/mL時，人肝癌細胞HepG2存活率小于10％。
　　 (二)流式細胞儀技術檢測，蜂毒素能夠誘導人肝癌細胞HepG2阻滯于S期，當作用時間為24h，藥物濃度為4μg/mL時，細胞S期比例明顯上升。
　　 (三)Westernblotting檢測，不同濃度蜂毒素作用細胞24h，以及4

4、μg/mL蜂毒素作用細胞0h、15min、30min、1h、2h后，均可抑制HMGB1的蛋白表達。
　　 (四)qRT-PCR檢測，不同濃度蜂毒素作用人肝癌細胞HepG224h后，以及4μg/mL蜂毒素作用細胞0h、15min、30min、1h、2h后，均可抑制HMGB1、VEGF-C及VEGF-D的mRNAs表達。
　　 四、結(jié)論:
　　 蜂毒素可抑制肝癌細胞生長，阻滯細胞周期于S期，并可能通過抑制HMGB1、