DNMT3B基因多態(tài)性與大腸腺瘤、大腸癌的關聯研究.pdf

1、目的：大腸癌是常見惡性腫瘤之一，發(fā)病率呈逐年上升趨勢。大腸癌的發(fā)生是多基因參與、多步驟、多階段的復雜過程，存在有各種內外因素交互作用導致的癌基因激活及抑癌基因失活等分子事件。DNA異常甲基化是人類惡性腫瘤發(fā)生的一種重要的表遺傳學機制，抑癌基因的失活與其啟動子高甲基化有密切關系。DNA甲基化是由DNA甲基轉移酶(DNA methyltransferases，DNMTs)催化完成的。高等真核生物中發(fā)現DNMTs有三種活性形式：DNMT1、D

2、NMT3A和DNMT3B，其中DNMT3B具有從頭甲基化(de novomethylation)活性，能使未甲基化的DNA發(fā)生甲基化。在惡性腫瘤中可觀察到，與DNMT1、DNMT3A相比較，DNMT3B呈明顯的過度表達，在腫瘤的發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用。本課題檢測了DNMT3B基因啟動子區(qū)轉錄起始點39179G-T多態(tài)性，以探索其與中國河北漢族人群大腸腺瘤和大腸癌遺傳易感性的關系。 方法：采用基于人群的病例-對照研究方法，對473

3、例個體(大腸腺瘤患者146例，大腸腺癌170例，正常對照個體157例)進行研究。所有標本均取自內鏡活檢的大腸粘膜組織，同時記錄吸煙飲酒狀態(tài)、家族史等信息。組織DNA的提取采用UNIQ-10柱式動物基因組DNA抽提試劑盒提供的方法進行，應用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性分析(polymerase chain reaction-restriction fragment lengthpolymorphasm，PCR-RFLP)方法檢測DN

4、MT3B的基因型。數據統計分析采用SPSS13.0版軟件包(SPSS Company,Chicago，Illinois，USA)進行，P＜0.05認為有統計學意義。對DNMT3B基因型在正常對照組中的分布情況進行Hardy-Weinberg平衡分析(http：//www.kursus.kvl.dk/shares/vetgen/_Popgen/genetik/applets/kitest.htm)。病例組與對照組的基因型分布比較采用行×列

5、表卡方檢驗。以非條件Logistic回歸法計算經性別、年齡、吸煙、飲酒狀況和CRC家族史校正的相對風險度的比值比(odds ratio，OR)及其95％可信區(qū)間(confidenceinterval，CI)。結果： 1.大腸腺瘤、腺癌患者中CRC家族史陽性者比例(分別為9.6％和11.8％)顯著高于健康對照組(3.8％)(x2=4.08，P=0.04；x2=7.04，P=0.008)。大腸腺瘤、腺癌患者組的吸煙者比例(25.3％

6、和30.0％)與正常對照組(24.2％)相比較，無顯著性差異(x2=0.05，P=0.82；x21.38，P=0.24)。兩組飲酒者比例(10.3％和8.8％)與正常對照組(7.0％)相比較，亦無顯著性差異(x2=1.03，P=0.31；x2=0.37，P=0.54)。 2.DNMT3B多態(tài)性位點基因型分布在大腸腺瘤、腺癌和正常對照組中均符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05)。DNMT3BG39179T多態(tài)在大腸腺

7、瘤、腺癌患者組和正常對照組中T/T、G/T+G/G基因型頻率分別為79.5％、20.5％，82.4％、17.6％和71.3％、28.7％。在大腸癌患者組中，攜帶G等位基因的基因型(G/T+G/G)頻率(17.6％)明顯低于正常對照組(28.7％)(P=0.01)。與T/T基因型相比，攜帶G等位基因的基因型(G/T+G/G)可降低總體大腸癌發(fā)病風險，經性別、年齡、吸煙、飲酒狀況和有無CRC家族史多因素校正后的OR值為0.50(95％CI=

8、0.29～0.87)。而大腸腺瘤組與正常對照組比較，攜帶G等位基因的基因型(G/T+G/G)頻率(20.5％)比正常對照組(28.7％)也有減低趨勢，但無顯著性差異(P＞0.05)，經性別、年齡、吸煙、飲酒狀況和有無CRC家族史多因素校正后的OR值為0.63(95％CI=0.37～1.09)。 3 分層分析3.1根據性別進行分層分析發(fā)現，與T/T基因型相比，攜帶G等位基因的基因型(G/T+G/G)可降低男性大腸癌的發(fā)病風險，經年齡、吸煙

9、、飲酒狀況和家族史校正后的OR值為0.35(95％CI=0.17～0.71)，但未發(fā)現與女性大腸癌發(fā)病風險相關，亦未發(fā)現DNMT3B多態(tài)與大腸腺瘤的易患性相關。 3.2根據年齡進行分層分析發(fā)現，與T/T基因型相比，攜帶G等位基因的基因型(G/T G/G)可降低55歲以下個體大腸癌的發(fā)病風險，經性別、吸煙、飲酒狀況和家族史校正后的OR值為0.3 1(95％CI=0.12～0.84)，但未發(fā)現與老年人大腸癌發(fā)病風險相關，亦未發(fā)現DN

10、MT3B多態(tài)與大腸腺瘤的易患性相關。 3.3根據個體吸煙狀況進行分層分析發(fā)現，與T/T基因型相比，攜帶G等位基因的基因型(G/T+G/G)可明顯降低吸煙個體大腸癌的發(fā)病風險，經性別、年齡、飲酒狀況和家族史校正后的OR值為0.24(95％CI=0.08～0.75)，未發(fā)現DNMT3B多態(tài)與大腸腺瘤的發(fā)病風險相關。 3.4根據個體飲酒狀況進行分層分析發(fā)現，與T/T基因型相比，攜帶G等位基因的基因型(G/T+G/G)可明顯降低

11、不飲酒個體大腸癌、大腸腺瘤的發(fā)病風險，經性別、年齡、吸煙狀況和家族史校正后的OR值分別為0.48(95％CI=0.27～0.84)和0.54(95％CI=0.31～0.96)。 3.5根據CRC家族史進行分層分析發(fā)現，與T/T基因型相比，攜帶G等位基因的基因型(G/T+G/G)可明顯降低CRC家族史陰性個體大腸癌的發(fā)病風險，經性別、年齡、吸煙、飲酒狀況校正后的OR值為0.48(95％CI=0.27～0.85)，未發(fā)現DNMT3B多態(tài)與大

12、腸腺瘤的發(fā)病風險相關。 結論： 1.大腸癌家族史可顯著增加大腸腺瘤、腺癌的發(fā)病風險。 2.T/T純合型在河北漢族正常人群中為常見基因型。 3.攜帶G等位基因的基因型(G/T 與G/G)可降低總體大腸腺癌的發(fā)病風險，對大腸腺瘤的發(fā)病風險也有降低趨勢，但無統計學意義。 4 DNMT3B基因多態(tài)性可能與55歲以下男性、吸煙、不飲酒、CRC家族史陰性個體大腸腺癌的發(fā)病風險相關，即攜帶G等位基因可顯著降低上