擬南芥受十字花科黑腐病菌誘導或抑制的miRNA的鑒定.pdf

1、miRNA(microRNA)是存在于真核生物細胞中長度～22nt(nucleotide)的內源非編碼RNA。miRNA參與生長發(fā)育、組織分化、腫瘤發(fā)生、細胞凋亡等一系列重要的生命過程。此外，miRNA在植物對抗病原菌入侵的防衛(wèi)反應中起重要作用。擬南芥是研究寄主植物與病原菌互作分子機理的模式植物。目前人們已經在擬南芥中發(fā)現(xiàn)了多個參與對抗丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae pv.Syringae，Pst)入侵的miRN

2、A。十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.Campestris，Xcc)是引起十字花科植物黑腐病的病原菌，同時也可以侵染擬南芥。但是，參與對抗Xcc侵染的擬南芥miRNA至今未見報道。研究表明，在對抗病原菌入侵的防衛(wèi)反應中起重要作用的miRNA的表達往往會受到病原菌的誘導或者抑制。本研究的目的是鑒定擬南芥中受Xcc誘導或者抑制的miRNA，為鑒定在對抗Xcc侵染過程中起重要作用的miRNA打下基礎。

3、>　　為此，我們首先采用高通量RNA測序(RNA-seq)技術，測定了擬南芥在沒有感染以及在感染Xcc后的不同時期的miRNA表達譜，并通過差異表達分析確定受Xcc誘導或抑制的候選的miRNA;然后采用定量Northern雜交方法對這些候選miRNA進行驗證。在進行高通量RNA測序前，我們首先建立了一種適合于測定擬南芥與病原菌互作過程中寄主和病原菌轉錄組變化的接種方法—真空抽濾法。隨后，我們測定了哥倫比亞0生態(tài)型(Col-0)擬南芥在沒

4、有感染以及在感染Xcc和hrcV基因突變體(△hrcV)后2、6、12和24小時的miRNA表達譜;通過表達差異分析，確定了10個受Xcc誘導的候選miRNA。定量Northern雜交驗證結果顯示，miR166和miR393在接種Xcc后2小時時的達量顯著升高，而miR160和miR156在接種后24小時時的表達量顯著升高，說明這些miRNA的表達受Xcc誘導。此外，通過Northern雜交，我們還發(fā)現(xiàn)了3個新的擬南芥miRNA。