TLR3在HSV-1感染小鼠NSCs中的作用研究.pdf

1、目的:
　　 1.探討TLR3在HSV-1感染小鼠NSCs中的作用，研究HSV-1通過TLR3對NF-κB轉錄活性及細胞因子TNF-α和IL-10表達的影響。
　　 2.研究TLR3在HSV-1感染小鼠NSCs中對IRF3磷酸化及IFN-β表達的影響。
　　 材料和方法:
　　 1.體外分離并用含mEGF、mbFGF和B27的NSCs生長培養(yǎng)基培養(yǎng)小鼠胚胎皮層NSCs，通過免疫熒光方法檢測NSCs標志物的

2、表達并對NSCs分化能力進行鑒定。
　　 2.HSV-1感染原代培養(yǎng)的第3代NSCs，通過免疫熒光、RT-PCR、Western blot、ELISA等方法分別檢測TLR3、NF-κB、TNF-α、IL-10 mRNA和蛋白的表達，同時研究NF-κB通路抑制劑PDTC及TLR3中和抗體對NF-κB通路的影響。
　　 3.HSV-1感染原代培養(yǎng)的第3代NSCs，并構建沉默TLR3的慢病毒載體感染NSCs，抑制TLR3的表達

3、，通過免疫熒光、RT-PCR、Western blot、ELISA等方法研究NSCs中TLR3和IRF3及IFN-β的表達特點。
　　 結果:
　　 1.正常狀態(tài)下，NSCs表達TLR3和NF-κB;被HSV-1感染的NSCs，核內NF-κB蛋白表達明顯增強，同時炎性細胞因子TNF-α、IL-10在mRNA和蛋白水平的表達均上調。PDTC可抑制NF-κB活化，使核內NF-κB蛋白表達下調，導致細胞內TNF-α、IL-10

4、 mRNA和蛋白的表達下調。用TLR3中和抗體阻斷NSCs表面TLR3后，核內NF-κB蛋白表達下調，TNF-α、IL-10 mRNA和蛋白也明顯下調，NSCs通過天然免疫抗病毒作用減弱，表現為HSV-1 gD mRNA在細胞內表達明顯增強，病毒滴度增高。
　　 2.NSCs被HSV-1感染后， IRF3 mRNA表達上調，其蛋白磷酸化也明顯增強，同時IFN-β mRNA和蛋白的表達也相應上調。用慢病毒抑制TLR3表達后，IRF

5、3mRNA及其蛋白磷酸化明顯下調，同時IFN-β mRNA和蛋白的表達也相應下調，并且HSV-1在細胞內復制增加，病毒滴度增高。
　　 結論:
　　 1.NSCs是HSV-1的完全容許細胞。正常NSCs表達TLR3、NF-κB;被HSV-1感染的NSCs通過TLR3活化NF-κB，從而上調炎性細胞因子TNF-α、IL-10的表達，發(fā)揮天然免疫抗病毒作用。
　　 2.HSV-1感染NSCs后，TLR3表達上調，促進