新型膠原真皮支架的制備及其純度測定與性能檢測.pdf

1、近年來皮膚組織工程的出現(xiàn)為改善創(chuàng)面修復質量、解決皮源不足等問題提供了嶄新的思路和方法。其中，真皮支架作為細胞外基質，為細胞提供了黏附、生長、遷移、增殖和分化的環(huán)境，在人工皮膚的構建中起著關鍵作用，一直是皮膚組織工程研究的重點。近年來，關于用豬的皮膚制備脫細胞真皮基質作為真皮支架用于構建人工皮膚已成為研究的熱點。但由于制備思路的局限與制備工藝的不足，目前脫細胞真皮基質存在著免疫原性強、滲透性差、生物活性低等缺點。本文以組織工程學原理為指導

2、，在前期研究的基礎上以及綜合考慮理想真皮支架的要求，采用新的制備工藝和多種化學、生物與物理綜合方法強化處理乳豬皮，制備一種不同于現(xiàn)有ADM、具有天然三維網(wǎng)絡結構的新型膠原真皮支架，重點研究了戊二醛交聯(lián)與堿膨脹的次序、戊二醛用量、酶用量與酶處理時間對支架材料理化性能的影響，優(yōu)化了關鍵制備工藝和膠原純度的測定方法，并對其主要性能進行檢測。主要研究內容和結果如下： (1)研究了戊二醛交聯(lián)與堿膨脹的次序、戊二醛用量、酶用量和處理時間對支

3、架材料理化性能的影響，實驗結果顯示：先交聯(lián)保護、后堿膨脹的支架材料的孔隙率和透水汽性能要高于先堿膨脹、后交聯(lián)的支架材料，故本實驗選定先交聯(lián)、后堿膨脹；隨著戊二醛用量的增加，支架材料拉伸強度和收縮溫度明顯升高，體外降解時間明顯延長，而孔隙率、透水汽性能和親水性隨著戊二醛用量的增加有所降低，但降低的幅度都不是很大；隨著酶用量的增大及作用時間的延長，支架材料的孔隙率提高，透水汽性增強。 (2)采用比色法測定新型膠原真皮支架中的膠原含量

4、，并對其水解工藝條件進行優(yōu)化，實驗結果顯示：新型膠原真皮支架最佳水解條件為每50mg干燥樣品加入6mol/L鹽酸10mL，100℃水解32h；此方法操作簡單，測得結果的變異系數(shù)為0.3759％，說明具有較好的重現(xiàn)性；新型膠原真皮支架的膠原含量均高達90％以上，高于軍事醫(yī)學科學院裝備研究所制備的膠原海綿支架(約74％)，說明本實驗制備的真皮支架中的表皮、脂肪和纖維間質等非膠原成分去除得比較徹底。 (3)以組織工程原理為指導，依據(jù)(

5、1)、(2)的研究結果，結合現(xiàn)有材料的優(yōu)點以及理想真皮支架材料的要求，制備出一種不同于現(xiàn)有ADM、具有天然真皮三維網(wǎng)絡多孔結構的新型膠原支架，對其主要性能進行檢測。研究結果顯示：新型膠原真皮支架呈乳白色，表面平整光滑，無肉眼可見的雜物和變色，經戊二醛交聯(lián)后，其質地明顯變韌，顏色變黃；光鏡檢測結果顯示真皮內的細胞成分已被去除掉，膠原纖維束保存完好；SEM觀察結果顯示支架材料的表面有大小不同的孔分布，且與支架內部相通，纖維束保持了其原有的天

6、然三維網(wǎng)絡結構并得到了適當?shù)乃缮?，支架內部具有豐富的多孔結構；其pH值在6.5～7.5范圍內，符合人體液pH值范圍；其孔隙率為70％左右，具有良好的孔隙率；其透水汽性能為2900g·m-2·24h-1左右，適合創(chuàng)面恢復；其拉伸強度介于10.15～11.56MPa之間，完全滿足臨床移植的要求；體外降解時間處于15～70h之間，并可根據(jù)需要采用交聯(lián)劑進行調整，從而滿足不同支架材料降解速率的要求；MTT法測定其細胞毒性為1級，符合植入人體生物