高血壓病患者中醫(yī)證候的血清蛋白質組學差異表達研究.pdf

1、背景:高血壓病(Essential Hypertension,EH)是最常見的心血管疾病,以體循環(huán)動脈壓增高為主要表現(xiàn)的臨床綜合征,占高血壓患者的95％以上。同時,又是一種危險因素,與冠心病、腦卒中、心力衰竭和腎功能障礙密切相關,是導致心腦血管疾病死亡的主要危險因素之一。發(fā)病機制不明確,可能與交感神經活性亢進、腎素.血管緊張素.醛固酮系統(tǒng)過度激活、潴鈉和排鈉系統(tǒng)異常、胰島素抵抗、血管重建、內皮細胞功能受損等因素相關。中醫(yī)認為:其形成是一

2、個長期的過程,由體質、情志、飲食、勞逸等多種因素交互作用所致。體質的陰陽偏盛或偏衰、稟賦不足、臟腑虧損為發(fā)病的內因；過度的精神緊張、情志的異常、飲食的偏嗜是發(fā)病的常見外因。病機根本為肝、脾、腎陰陽失調、運化失施,日久津血運行不暢,痰濕阻滯,脈絡不利；或暗耗津血,營血受損,血脈瘀滯；或陰陽兩虛,痰瘀痹阻,橫竄經隧,并最終累及他臟發(fā)展成為胸痹、中風、昏厥等變證。目前不管是現(xiàn)代醫(yī)學還是傳統(tǒng)醫(yī)學對其發(fā)病因為都不明確。蛋白質組學的出現(xiàn),在探討EH

3、的發(fā)病機理、深入研究中醫(yī)證候的本質、豐富中醫(yī)辨證的手段等諸多方面,日益顯現(xiàn)出其重要作用。
　　 目的:研究EH中醫(yī)不同證候患者血清蛋白質組學表達的差異,篩選EH不同中醫(yī)證候特異蛋白標志物,尋找中醫(yī)辨證的客觀指標。
　　 方法:對EH患者進行辨證分型,最后納入EH肝膽濕熱證(GDSR)40例、痰濕壅盛證(TSYS)40例、陰虛陽亢證(YXYK)15例,并隨機選擇健康體檢人員(Health)39例。對所有入選人員血清蛋白質組

4、學進行質譜分析(基質輔助激光解析電離飛行時間質譜MALDI-TOF-MS)。進一步運用Proteinchip Software3.2.0&Biomarker PatternsTM Software5.0(BPS)軟件對圖譜進行分析,對數(shù)據(jù)進行篩選、建立決策模型。
　　 結果:
　　 1.所有入選的EH患者血清蛋白質譜與Health組比較共發(fā)現(xiàn)179個差異蛋白峰(P<0.05),其中20個表達增高,表達降低的159個。進一

5、步篩選時發(fā)現(xiàn):分子量為4175.258m/z的蛋白峰在EH組中均呈現(xiàn)低水平表達,以相對強度值6.116為分界線,EH患者表達均在分界線以下,健康人表達均在分界線以上,可將所有EH患者血清質譜與健康人質譜完全區(qū)分開來。
　　 2.GDSR組血清蛋白質譜與Health組比較共發(fā)現(xiàn)182個差異蛋白峰(P<0.05),其中23個表達增高,表達降低的159個。
　　 3.TSYS組血清蛋白質譜與Health組比較共發(fā)現(xiàn)168個差異

6、蛋白峰(P<0.05),其中15個表達增高,表達降低的153個。
　　 4.YXYK組血清蛋白質譜與Health組比較共發(fā)現(xiàn)124個差異蛋白峰(P<0.05),其中7個表達增高,表達降低的117個。
　　 5.GDSR組與TSYS組蛋白質譜比較兩組間有差異的蛋白質峰有46個(P<0.05),其中GDSR組較TSYS組表達增高的有14個,表達降低的32個。
　　 6.GDSR組與YXYK組蛋白質譜比較發(fā)現(xiàn)有差異的蛋

7、白質峰有72個(P<0.05),GDSR組較YXYK組表達增高的有26個,表達降低的46個。
　　 7.TSYS組與YXYK組蛋白質譜比較發(fā)現(xiàn)兩組間有差異的蛋白質峰有22個(P<0.05),TSYS組較YXYK組表達增高的有3個,表達降低的19個。
　　 8.BPS軟件篩選GDSR證的最佳標志物。結果m/z為2487.19,9334.95,2238.14,6624.36,5903.54的5個蛋白峰為GDSR證的最佳標志物

8、。這5個蛋白標志物組成的訓練模型能很好的將GDSR證區(qū)分出來,該模型的敏感性Sensitive=86.667％,特異性Specificty=96.552％,假陽性率False positive rate=3.448％,假陰性率False negative rate=13.333％,Youden's index=83.219％
　　 9.BPS軟件篩選TSYS證的最佳標志物。結果顯示m/z為3161.26,7922.98,7555

9、.76,8030.79,3936.31的5個蛋白峰為TSYS證的最佳標志物,這5個蛋白標志物組成的訓練模型能很好的將TSYS證區(qū)分出來,其敏感性Sensitive=96.552％,特異性Specificty=83.333％,假陽性率False positive rate=16.667％,假陰性率False negative rate=3.448％,Youden's index=79.885％
　　 結論:
　　 1.EH

10、患者與健康人血清蛋白質譜之間差異蛋白峰所代表的蛋白質或多肽可能是EH發(fā)病相關蛋白。對其進行進一步分離與鑒定對揭示EH發(fā)病機制至關重要。
　　 2.不同證候患者之間血清蛋白質譜中差異表達的蛋白峰,可能是其證候外在表現(xiàn)的內在物質基礎。對差異蛋白的鑒定及功能的確定有望揭示中醫(yī)證候的本質。
　　 3.GDSR證和TSYS證特異蛋白標記物的篩選及證候模型的建立,在分子生物層面上為GDSR證和TSYS證的蛋白組學表達確立了客觀標志。