丹參酮ⅡA磺酸鈉在海水淹溺性肺水腫中的作用及其機(jī)制.pdf

1、研究背景：
　　淹溺是全球最重要的公共健康問(wèn)題之一，是意外傷害致死的第二大原因。海水淹溺不僅是海上生產(chǎn)作業(yè)、航海事故的主要死亡原因，更是軍隊(duì)在海上作戰(zhàn)、訓(xùn)練等非戰(zhàn)斗減員的重要原因。海水淹溺后，除因喉頭、氣管反射性痙攣引起患者急性窒息外，引起死亡的主要原因是海水淹溺性肺水腫(pulmonaryedemaofseawaterdrowning，PE-SWD)，若得不到及時(shí)有效的救治，則可能進(jìn)展為海水型呼吸窘迫綜合征(seawaterre

2、spiratorydistresssyndrome，SW-RDS)，死亡率較高。因此有效治療PE-SWD及其引起的損傷是成功救治淹溺患者的關(guān)鍵。有研究表明，肺泡上皮細(xì)胞鈉-鉀ATP酶（Na+/K+-adenosinetriphosphatase，NKA)在促進(jìn)肺泡內(nèi)液體的吸收中發(fā)揮著重要作用。因此上調(diào)NKA活性對(duì)促進(jìn)肺水腫液的吸收，改善PE-SWD的預(yù)后至關(guān)重要。
　　丹參酮IIA磺酸鈉(sodiumtanshinoneIIAsu

3、lphonate,STS)是丹參酮IIA的衍生物，在丹參中含量最多。STS具有多種藥理作用，已廣泛用于心腦血管疾病的治療，還具有抗炎及抗氧化的作用。亦有文獻(xiàn)報(bào)道STS在脂多糖引起的急性肺損傷中可減輕肺水腫及改善缺氧，但有關(guān)其在PE-SWD中的作用尚缺乏研究。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)復(fù)制大鼠PE-SWD模型來(lái)觀察STS對(duì)PE-SWD的治療作用及對(duì)NKA的影響，并通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討STS發(fā)揮作用的可能機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　目的：<

4、br>　　通過(guò)建立大鼠PE-SWD模型及培養(yǎng)A549細(xì)胞，探討STS在減輕PE-SWD中的作用，和其對(duì)NKA的影響，并通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究了ERK信號(hào)通路在STS調(diào)節(jié)NKA中的潛在機(jī)制。
　　方法：
　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：
　　1、實(shí)驗(yàn)分組及模型的制備:將48只大鼠隨機(jī)分為正常組（normalgroup）、STS組（STSgroup）、海水組（SWgroup）、海水+STS組（SW+STSgrouop），每組12只。氣管內(nèi)滴入4m

5、l/kg海水以建立大鼠PE-SWD模型，在海水灌注后立即腹腔內(nèi)注射25mg/kgSTS。
　　2、觀察指標(biāo)：1）PaO2：通過(guò)血?dú)夥治鰴z測(cè)各組海水灌注前、海水灌注后30min、1h、2h、4h、6h的PaO2。2）肺組織病理學(xué)：造模4小時(shí)后，觀察各組肺組織病理學(xué)改變。3）肺水腫指數(shù)檢測(cè)：海水灌注4小時(shí)后，測(cè)定肺濕/干重比值(W/D)和肺毛細(xì)血管通透性(PMVP)。4）NKA的表達(dá)及活性：利用試劑盒檢測(cè)各組肺組織勻漿中NKA活性，采

6、用Westernblot檢測(cè)NKAα1、β1亞基蛋白表達(dá)，并用RT-PCR方法檢測(cè)NKAα1、β1mRNA水平。
　　細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：
　　1、實(shí)驗(yàn)分組及細(xì)胞的處理：將A549細(xì)胞隨機(jī)分為正常組（normalgroup）、STS組（STSgroup）、海水組（SWgroup）、海水+STS組（SW+STSgrouop）、海水+STS+ERK抑制劑（U0126）組（SW+STS+U0126grouop）。海水（海水：培養(yǎng)液=1:4）

7、刺激細(xì)胞4h，在加入海水后立即加入25ug/mlSTS,U0126在加入STS前30min作用于細(xì)胞。
　　2、觀察指標(biāo)：1）NKA的表達(dá)及活性：利用試劑盒檢測(cè)各組細(xì)胞的NKA活性，采用Westernblot檢測(cè)各組NKAα1、β1亞基。2）ERK1/2的表達(dá)：采用Westernblot檢測(cè)各組ERK1/2蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：
　　1、PaO2：PE-SWD模型建立后30min，PaO2即降低

8、到最低點(diǎn)，后緩慢升高，但低氧仍明顯，STS治療組從海水灌注后2h開(kāi)始PaO2顯著高于海水組(P<0.05)，到4h時(shí)PaO2值增高達(dá)高峰（P<0.01）,表明STS可改善海水灌注導(dǎo)致的缺氧。
　　2、病理學(xué)改變：海水組的肺組織出血、水腫，肺泡間隔明顯增厚、斷裂及炎性細(xì)胞滲入肺泡腔，而STS治療組肺損傷病理學(xué)結(jié)果較海水組明顯減輕,表明STS可減輕海水灌注導(dǎo)致的肺組織損傷。
　　3、肺水腫指標(biāo)：海水吸入導(dǎo)致肺W/D、PMVP增加

9、，而STS治療組較海水組的W/D、PMVP明顯下降(P<0.05)，表明STS可減輕海水引起的肺水腫。
　　4、肺組織中NKA表達(dá)及活性：海水吸入后肺組織的NKA活性及NKAα1、β1亞基蛋白表達(dá)及mRNA水平均明顯下降，而STS治療組的NKAα1、β1亞基蛋白表達(dá)及NKA活性均較海水組明顯增加(P<0.05)。而在mRNA水平上，STS組的NKAβ1亞基的mRNA顯著增加(P<0.05)，但NKAα1亞基的mRNA卻與海水組無(wú)明

10、顯變化。
　　細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：
　　1、A549細(xì)胞的NKA表達(dá)及活性：海水浸泡A549細(xì)胞后，細(xì)胞的NKAα1、β1亞基蛋白表達(dá)、NKA活性均顯著降低，而STS治療組使上述指標(biāo)均有所增高(P<0.05)（這與大體實(shí)驗(yàn)的結(jié)果基本一致），但加入了ERK抑制劑（U0126）后，NKAα1、β1亞基蛋白表達(dá)、NKA活性均較STS治療組明顯降低，表明STS對(duì)NKA的上調(diào)作用可部分被ERK抑制劑所阻斷。
　　2、A549細(xì)胞的ERK1

11、/2表達(dá)：海水使細(xì)胞的ERK1/2蛋白表達(dá)降低，而STS治療組增加了ERK1/2蛋白的表達(dá)，表明STS可刺激ERK1/2蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1、在鼠PE-SWD中，STS可改善缺氧、減輕肺水腫及肺組織損傷。
　　2、大體實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，STS可通過(guò)上調(diào)NKA的表達(dá)及活性，從而促進(jìn)肺泡內(nèi)液體的吸收，以減輕肺水腫。
　　3、在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，STS可刺激ERK1/2蛋白的表達(dá)，而ERK1/2抑制劑可部分阻斷S