昆蟲病原線蟲共生菌YL001的分子鑒定及殺蟲毒性基因的克隆.pdf

1、昆蟲病原線蟲共生菌是共生于昆蟲病原線蟲(entomopathogeic nematodes，EPNs)腸道內的一類細菌，在.EPNs中對昆蟲的致病力起關鍵性作用，與線蟲之間的關系可以概括為：線蟲攜帶共生菌進入寄主昆蟲體內，并釋放到昆蟲的血腔中；共生菌在昆蟲血腔內繁殖，產(chǎn)生殺蟲活性極高的蛋白毒素，使昆蟲患敗血癥，一般在48h內死亡。由于這類殺蟲毒素蛋白具有高效、殺蟲譜廣和殺蟲迅速等諸多優(yōu)點，從共生菌中克隆殺蟲毒性基因用于開發(fā)新型生物源殺蟲

2、物質，以延緩害蟲對目前使用的殺蟲物質產(chǎn)生的抗性，已成為當今的研究熱點。昆蟲病原線蟲共生菌已成為一類有待開發(fā)的生物資源，基于此，昆蟲病原線蟲共生菌的分類鑒定是開展相關研究的基礎。 分子鑒定：昆蟲病原線蟲共生菌YL001是西北農(nóng)林科技大學無公害農(nóng)藥研究中心分離得到的一株有較強殺蟲活性的共生菌，其分子鑒定是根據(jù)目前已知16s tDNA基因，設計引物對P<,1>P<,2>，以YL001菌株的總DNA為模板進行PCR擴增，產(chǎn)物大小為568

3、bp， GenBank的接收號為EF206655，此序列與GenBank登錄號為XNl6RNA0的序列相似性達99.5％。構建系統(tǒng)進化樹，顯示與.Xenorhabdus nematophilus的親緣關系最近。昆蟲病原線蟲共生菌YL001與GenBank中現(xiàn)有的昆蟲病原線蟲共生菌同源序列進行比對，與Xenorhabdus nematophilus的相似形高達99.5％，遺傳距離為0.5，進一步證實了該菌株就是.Xenorhabdus n

4、ematophilus。 殺蟲毒性基因的克隆：以YL001為材料，根據(jù)已報道的殺蟲毒素基因-菌毛蛋白亞基序列，設計引物對P<,3>P<,4>，以YL001菌株的總DNA為模板進行PCR擴增，獲得特異性片斷，并將此片斷克隆到T-easy載體上，獲得了重組子pGEM-PSYL001，序列測定和分析結果表明，PSYL001閱讀框全長537bp，編碼179個氨基酸，預測分子質量和等電點分別為18.9ku和6.94，GenBank的接收號