小鼠卵細(xì)胞質(zhì)對(duì)供體核DNA甲基化和“印記”基因表達(dá)的調(diào)控.pdf

1、為了區(qū)分核移植重組胚中所表達(dá)的U2afbp-rs基因是來(lái)源于父源還是母源的，本文作者利用單核苷酸單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)方法檢測(cè)KM、B6、Balb/c、129S1、C3H、DBA和A/J品系中小鼠U2afbp-rs基因的多態(tài)性，以檢測(cè)出這些品系小鼠間可能存在的多態(tài)位點(diǎn)；利用細(xì)胞核移植技術(shù)將NIH3T3細(xì)胞核和孤雌桑椹胚單個(gè)卵裂球分別移植到去核MⅡ期受體卵母細(xì)胞中，通過(guò)免疫熒光染色后比較體外受精胚、孤雌胚、NIH3T3核移植重組胚和孤

2、雌桑椹胚核移植重組胚附殖前各時(shí)期胚胎DNA甲基化水平的變化，以探明克隆胚細(xì)胞核去分化與DNA甲基化的相互關(guān)系；利用Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)體外受精胚、孤雌胚和孤雌桑椹胚核移植重組胚附殖前各時(shí)期胚胎中印記基因U2afbp-rs基因以及非印記基因eIF-4C基因表達(dá)量的變化，以探明小鼠卵細(xì)胞質(zhì)對(duì)克隆胚細(xì)胞核中印記基因表達(dá)的調(diào)控。結(jié)果表明： 1．盡管國(guó)外有文獻(xiàn)報(bào)道了U2afbp-rs基因在C57BL/6J和PWK品系間存在著

3、豐富的多態(tài)位點(diǎn)，但這些位點(diǎn)在本研究所檢測(cè)的小鼠品系中并不存在多態(tài)性，提示U2afbp-rs基因可能在KM、B6、Balb/c、129S1、C3H、DBA和A/J品系小鼠中并不存在多態(tài)位點(diǎn)。 2．體外受精胚中印記基因U2afbp-rs和非印記基因eIF-4C都正常表達(dá)，它們?cè)谛∈骦GA時(shí)期都發(fā)生瞬時(shí)高表達(dá)。但在孤雌胚中，U2afbp-rs和eIF-4C基因都出現(xiàn)異常的表達(dá)模式，這可能是DNA甲基化與染色質(zhì)結(jié)構(gòu)改變的相互影響所導(dǎo)致的