A型肉毒毒素對(duì)SD孕鼠激素水平及胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、目的:探討肌肉注射A型肉毒毒素(BTX-A)對(duì)SD孕鼠血清雌激素、孕激素及其受體在生殖器官中表達(dá)的影響,了解BTX-A對(duì)胚胎的發(fā)育毒性,為BTX-A在臨床用藥的安全性提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)參考數(shù)據(jù)。
　　方法:
　　1.BTX-A急性毒性試驗(yàn):對(duì)SD雄性大鼠肌肉注射BTX-A檢測(cè)最小致死量(MLD)與半數(shù)致死量(LD50)。(1)選健康成年普通級(jí)雄性SD大鼠20只,隨機(jī)分為4組,右側(cè)腓腸肌肌肉注射15U/kg、30U/kg、60

2、U/kg、90U/kgWB4個(gè)劑量的BTX-A,觀察BTX-A對(duì)大鼠的最小致死劑量(在90U/kg)。(2)選雄性SD大鼠50只,隨機(jī)分為5組,以MLD為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)右側(cè)腓腸肌肌肉注射劑量62U/kg、77U/kg、96U/kg、120U/kg、150U/kgWB5個(gè)劑量組,觀察各組大鼠中毒、死亡情況,根據(jù)孫氏綜合法改進(jìn)的查表法,計(jì)算出BTX-A對(duì)SD大鼠7天的LD50。
　　2.BTX-A對(duì)SD孕鼠血清雌激素、孕激素及受體表達(dá)、胚胎

3、發(fā)育的影響:選SD孕鼠60只,隨機(jī)分為6組每組10只。陰性對(duì)照組(NS,0.5ml/只)肌肉注射;A型肉毒毒素藥物組分4個(gè)劑量(BTX-A30U/kg、60U/kg、90U/kg、120U/kgWB)肌肉注射;維甲酸藥物對(duì)照組(100mg/kgWB灌胃)。各組孕鼠均于孕第8天給藥1次,于孕18天麻醉取材。(1)孕鼠檢測(cè)指標(biāo):測(cè)孕期體重增重率、卵巢與子宮重量指數(shù)、ELISA法測(cè)孕鼠血清雌激素、孕激素水平和IHC法測(cè)卵巢、子宮的雌激素受體與

4、孕激素受體表達(dá)的情況。(2)胚胎檢測(cè)指標(biāo):胚胎畸形、存活率、胎重、身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)及四肢主要骨的骨長(zhǎng)與骨化的檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　1. BTX-A對(duì)大鼠急毒試驗(yàn):(1)最小致死量檢測(cè)(MLD):正常成年雄性大鼠分4組肌肉注射 BTX-A(15U/kg、30U/kg、60U/kg、90U/kg),當(dāng)劑量為90U/kg時(shí)出現(xiàn)急性中毒癥狀并出現(xiàn)死亡,由此提示BTX-A對(duì)大鼠的MLD為90U/kg。(2)半數(shù)致死量檢測(cè)(LD50):在M

5、LD基礎(chǔ)上再設(shè)BTX-A62U/kg、77U/kg、96U/kg、120U/kg、150U/kg等5個(gè)劑量組,最高劑量組(150U/kg)中毒癥狀最嚴(yán)重,7天死亡率達(dá)100％,根據(jù)孫氏綜合法改進(jìn)的查表法計(jì)算得出BTX-A對(duì)大鼠的LD50為114.77U/kg。
　　2. BTX-A對(duì)SD孕鼠孕期體重增重率、血清激素水平、生殖器官重量指數(shù)及其激素受體的影響:孕第18天檢測(cè)各組孕鼠:①各組孕鼠在孕15天時(shí),除BTX-A30U/kg劑量

6、組外,BTX-A其余3個(gè)劑量組孕鼠體重均低于陰性對(duì)照組,孕18天時(shí)僅有120U/kg劑量組體重低于陰性對(duì)照組,相比均有顯著性差異(P<0.05);②BTX-A4個(gè)劑量組的血清雌激素、孕激素值均低于陰性對(duì)照組,除30U/kg劑量組以外,其余3組與陰性對(duì)照組比較,均有顯著性差異(P<0.05)。③卵巢和子宮90U/kg、120U/kg劑量組的重量指數(shù)均低于陰性對(duì)照組,相比均有顯著性差異(P<0.05)。④BTX-A各劑量組孕鼠子宮內(nèi)膜與卵巢

7、黃體的 ER、PR表達(dá)均高于陰性對(duì)照組,相比均有顯著性差異(P<0.05)。且隨著BTX-A劑量增加而表達(dá)增強(qiáng)。
　　3. BTX-A對(duì)大鼠E18胚胎發(fā)育的影響:①BTX-A劑量為120U/kg時(shí),胚胎活胎率低于與陰性對(duì)照組,兩組相比有顯著性差異(P<0.05)。BTX-A60U/kg、90U/kg劑量組出現(xiàn)畸形胚胎。②BTX-A120U/kg劑量組胚胎體重、尾長(zhǎng)與身長(zhǎng)均低于陰性對(duì)照組,比較有顯著性差異(P<0.05),BTX-A

8、4個(gè)劑量組的胎盤重均低于陰性對(duì)照組,相比較均有顯著性差異(P<0.05)。③BTX-A劑量達(dá)60U/kg、90U/kg時(shí)前肢肩胛骨、肱骨、尺骨、橈骨及后肢髖骨長(zhǎng)度小于陰性對(duì)照組,比較有顯著性差異(P<0.05),而股骨、脛骨、腓骨長(zhǎng)度在BTX-A劑量60U/kg、90U/kg時(shí)均低于陰性對(duì)照組,比較有顯著性差異(P<0.05)。上述所有骨的骨化點(diǎn)長(zhǎng)度在BTX-A的劑量30U/kg、60U/kg、90U/kg時(shí)均小于陰性對(duì)照組,相比較均有

9、顯著性差異(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　4.1大鼠肌肉注射BTX-A的最小致死劑量為90U/kg,而半數(shù)致死量為114.77U/kg。
　　4.2本實(shí)驗(yàn)條件下,孕鼠肌肉注射BTX-A劑量小于30U/kg時(shí)無(wú)母體毒性,無(wú)胚胎發(fā)育毒性。當(dāng)劑量大于60U/kg時(shí)隨劑量增加,孕鼠母體毒性與胚胎發(fā)育毒性逐漸加重,且有致畸作用。
　　提示:微量肌肉注射BTX-A在安全劑量范圍內(nèi)(小于30U/kg)無(wú)孕鼠母體毒性及胚胎發(fā)