畢赤酵母表達牛氣管抗菌肽的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、牛氣管抗菌肽(bTAP)是牛氣管黏膜上皮細胞分泌的具有廣譜抗菌活性的多肽。與抗生素的作用機制不同，抗菌肽為動物體天然的防御因子，不易產生耐藥菌株，是一類具有巨大發(fā)展?jié)摿Φ男滦涂咕幬?，但天然抗菌肽的產量極低。畢赤酵母(Pichia Pastoris)不僅具有真核表達系統(tǒng)的蛋白翻譯后加工修飾等優(yōu)點，而且基因操作相對簡單，表達水平較高。 本研究根據已發(fā)表的bTAP基因序列和酵母細胞的密碼子偏愛性設計兩對引物，以重疊延伸PCR擴增出b

2、TAP成熟肽編碼序列，然后將其構建到巴斯德畢赤酵母分泌型表達載體pPIC9K中，用限制性內切酶Sal Ⅰ或BglⅡ酶切線性化后轉化畢赤酵母GS115株感受態(tài)細胞，在組氨酸缺乏的培養(yǎng)基上篩選得轉化酵母菌，然后在含不同濃度G418的YPD平板上培養(yǎng)，篩選得抗3mg/ml G418的Mm+型重組酵母菌3株，抗1mg/ml G418的Muts型酵母菌1株。在此基礎上，以初次轉化的重組酵母菌制備感受態(tài)細胞，用同樣線性化的重組質粒進行二次電轉化，并

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