初情期雌性山羊lncRNA的篩選與鑒定.pdf

1、初情期是雌性哺乳動物發(fā)育過程中重要的階段，是具備繁殖能力的關(guān)鍵標(biāo)志。最近研究發(fā)現(xiàn)，哺乳動物初情期啟動受表觀遺傳調(diào)控。長鏈非編碼RNA(Long noncoding RNA，lncRNA)做為表觀遺傳的重要組成部分，幾乎參與調(diào)控哺乳動物各個發(fā)育階段。然而，目前l(fā)ncRNA在山羊初情期調(diào)控方面的研究還未見報道。本研究通過利用RNA-seq技術(shù)分析雌性山羊下丘腦轉(zhuǎn)錄本表達(dá)模式，篩選參與調(diào)控山羊初情期的lncRNA及其富集通路并進(jìn)行初步的功能驗

2、證。
　　通過公羊試情，觀察外陰及卵巢變化確定雌性山羊初情期時間。首先，采用二代高通量測序技術(shù)對初情期(月齡:4.5M～5M;體重:16.17±0.50kg)和初情期前(月齡:2.5M～3M;體重:8.30±0.61kg)雌性山羊下丘腦轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行測序分析，篩選差異表達(dá)的lncRNA，然后進(jìn)行l(wèi)ncRNA靶基因預(yù)測和通路富集分析，并用熒光定量PCR方法對測序結(jié)果進(jìn)行驗證，篩選出候選lncRNA。分離1d雌性大鼠下丘腦神經(jīng)元進(jìn)行原代培

3、養(yǎng)，采用siRNA干擾方法驗證候選lncRNA的功能，熒光定量PCR檢測靶基因表達(dá)水平。
　　結(jié)果表明，篩選到2943個lncRNAs，包括2012個差異表達(dá)的lncRNAs靶向作用于5412個蛋白編碼基因，發(fā)現(xiàn)有許多差異lncRNA的靶基因與初情期調(diào)控有關(guān);通過KEGG和GO分析富集到許多參與調(diào)控初情期和生殖相關(guān)的通路，如催產(chǎn)素信號通路，類固醇生物合成通路和信息素受體激活信號通路。體外添加siRNA干擾候選lncRNAXLOC4

4、46331表達(dá)，發(fā)現(xiàn)下丘腦神經(jīng)元中l(wèi)ncRNA XLOC446331及其靶基因IGFBP5表達(dá)顯著下調(diào)(P＜0.01)，初情期相關(guān)的IGF-1表達(dá)也受到顯著抑制（P＜0.05）。
　　總之，本試驗首次報道了初情期雌性山羊下丘腦存在差異表達(dá)的lncRNA，這些差異表達(dá)的lncRNA及其靶基因富集通路很可能在山羊生殖及初情期調(diào)控中發(fā)揮著重要作用;候選lncRNAXLOC_446331可能通過作用于IGFBP5基因參與調(diào)控初情期。這為進(jìn)