RNAi沉默IGF-1R表達對宮頸癌Hela細胞生長和藥物敏感性的實驗研究.pdf

1、碩士學位論文論文題目RNAi沉默IGF1R表達對宮頸癌Hela細胞生長和藥物敏感性的實驗研究研究生姓名武煒指導教師姓名申詠梅專業(yè)名稱臨床檢驗診斷學研究方向腫瘤基因治療論文提交日期2013年3月RNAi沉默IGF1R表達對宮頸癌Hela細胞生長和藥物敏感性的實驗研究中文摘要IRNAi沉默IGF1R表達對宮頸癌Hela細胞生長和藥物敏感性的實驗研究中文摘要目的：的：宮頸癌是最常見的女性生殖道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率已超過結直腸癌，僅次于乳腺癌

2、，躍居女性惡性腫瘤的第二位。目前治療宮頸癌傳統的方法是手術、放療和化療，但作用效果有限且副作用明顯，而近幾年來興起的RNA干擾（RNAi）技術給宮頸癌的治療帶來了新的希望。本課題選擇與胰島素樣生長因子（IGFs）信號傳導通路有關的胰島素樣生長因子1受體（IGF1R）作為研究對象，利用RNAi技術，通過構建IGF1RshRNA重組質粒表達載體轉染人宮頸癌Hela細胞，體內、外觀察沉默IGF1R基因對Hela細胞生長的影響，并聯合化療藥物順

3、鉑刺激，以檢測其敏感性變化，為進一步研究宮頸癌的基因治療奠定實驗基礎。方法：法：①根據GenBank中IGF1R基因的cDNA序列，通過軟件分析IGF1RmRNA結構篩選出四個擬干擾靶位點，并設計四條干擾序列和一條與人類任何基因均無同源性的陰性對照序列，并將其構建成IGF1RshRNA重組質粒表達載體，經測序和酶切鑒定后，提取各重組質粒轉染Hela細胞；②實驗分為六組，即pGPU6IGF1R1組、pGPU6IGF1R2組、pGPU6IG

4、F1R3組、pGPU6IGF1R4組、pGPU6NC組和空白對照Blank組，分別進行體內外實驗；③瞬時轉染24h、48h、72h時，熒光顯微鏡和流式細胞儀分別檢測各組細胞的轉染效率；RTPCR檢測各組細胞IGF1R和MMP9mRNA的表達；流式細胞儀檢測IGF1R蛋白表達；Hoechst33258檢測各組轉染細胞的凋亡情況；CCK8檢測各組轉染細胞的增殖能力及對順鉑（DDP）刺激的敏感性，根據以上實驗結果從四條干擾序列中選擇一條干擾效