HBcAg基因修飾的DC疫苗抗HBV的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是引起世界范圍內(nèi)乙型肝炎的高發(fā)病率和死亡率的主要原因.本研究通過構(gòu)建HBcAg重組腺病毒載體(AD-C),體外轉(zhuǎn)染小鼠DC,觀察其與HBsAg重組腺病毒載體(AD-S)體內(nèi)外免疫刺激活性及抗HBV免疫功能,并研究和評(píng)價(jià)兩種腺病毒載體-DC疫苗在HBV轉(zhuǎn)基因小鼠中誘導(dǎo)抗HBV免疫的作用特點(diǎn)及其對(duì)HBV持續(xù)感染的可能治療作用和應(yīng)用前景,為該疫苗用于慢性乙型肝炎的治療提供實(shí)驗(yàn)和理論

2、依據(jù).本研究分三部分.第一部分HBcAg重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定結(jié)論1.成功構(gòu)建了復(fù)制缺陷型HbcAg重組腺病毒（Ad-C）2.重組腺病毒Ad-C能高效轉(zhuǎn)染HBVC基因并主要在被轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)有效表達(dá)目的蛋白.第二部分比較HBcAg和/或HBsAg重組腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的小鼠樹突狀細(xì)胞體內(nèi)外免疫功能的研究結(jié)論1.證實(shí)Ad-C、Ad-S、Ad-C+Ad-S體外轉(zhuǎn)導(dǎo)的小鼠DC不影響DC表型成熟、同種異體和自體T細(xì)胞刺激活性及誘導(dǎo)Th1/Tc1(Ⅰ型)

3、細(xì)胞應(yīng)答的作用.2.Ad-C轉(zhuǎn)導(dǎo)的DC免疫小鼠后能增強(qiáng)小鼠Ⅰ型免疫應(yīng)答,誘導(dǎo)比DNA疫苗更強(qiáng)的Th1細(xì)胞應(yīng)答,以及比HBcAg蛋白沖擊DC和DNA疫苗更強(qiáng)的Tc1和特異性CTL反應(yīng),是誘導(dǎo)抗HBV細(xì)胞免疫的有效刺激細(xì)胞.Ad-C聯(lián)合Ad-S轉(zhuǎn)導(dǎo)的DC能夠產(chǎn)生最強(qiáng)的Th1、Tc1細(xì)胞應(yīng)答和特異性CTL反應(yīng).3.DC/Ad-C+Ad-S組、DC/Ad-C組和DC/Ad-S組轉(zhuǎn)導(dǎo)的DC疫苗均能增強(qiáng)小鼠抗HBV細(xì)胞免疫應(yīng)答的作用,其產(chǎn)生Th1、

4、Tc1細(xì)胞應(yīng)答和特異性CTL反應(yīng)的能力依次減弱;均能誘導(dǎo)抗-HBc,但其作用均不如DNA疫苗,可根據(jù)治療要求考慮聯(lián)合DC疫苗或其它方法.第三部分比較C和/或S基因修飾的樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)HBV轉(zhuǎn)基因小鼠抗HBV免疫的研究結(jié)論1.DC/Ad-C+Ad-S、DC/Ad-C和DC/Ad-S能誘導(dǎo)更強(qiáng)的Ⅰ型免疫應(yīng)答和特異性CTL免疫,對(duì)HBV Tg小鼠血清HBsAg、HBV DNA水平和肝臟組織HBsAg和HBcAg的表達(dá)有較迅速和明顯的抑制作用,

5、三者上述作用依次減弱.2.DC/Ad-C比HBcAg蛋白沖擊DC及DNA疫苗能誘導(dǎo)更強(qiáng)的Ⅰ型免疫應(yīng)答和特異性CTL免疫,對(duì)HBV Tg小鼠血清HBsAg、HBV DNA水平和肝臟組織HBsAg和HBcAg的表達(dá)有較迅速和明顯的抑制作用,是有較好應(yīng)用前景的慢性乙型肝炎的治療性疫苗.相關(guān)研究迄今未見文獻(xiàn)報(bào)道.3.DC/Ad-C+Ad-S、DC/Ad-C、HBcAg蛋白沖擊DC及DNA疫苗轉(zhuǎn)導(dǎo)的DC能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生血清抗-HBc,其中DNA疫苗的