上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在大鼠舌黏膜創(chuàng)傷愈合過程中的作用及意義.pdf

1、背景與目的：口腔是人體攝食的重要通道，口腔黏膜是口腔內(nèi)的一層濕潤襯里，具有屏障保護(hù)功能及感覺功能。口內(nèi)黏膜損傷既有因頜面部位置暴露導(dǎo)致外傷頻發(fā)誘發(fā)的口內(nèi)黏膜損傷，亦有病因尚不明確的口腔潰瘍。不論損傷原因為何，口腔黏膜的損傷都會影響人類咀嚼、吞咽、語言活動，對患者生活、社交甚至心理都會產(chǎn)生嚴(yán)重影響。臨床上為此就診的病人也屢見不鮮。然而，目前臨床常用的促黏膜愈合藥物主要以抗感染藥物為主，少見真正的促愈合藥物。因此，尋找一種有效的、安全的、便

2、捷的療法促黏膜愈合，會為患者的生活質(zhì)量帶來極大的提高。
　　越來越多的研究闡明EMT與皮膚創(chuàng)傷愈合的關(guān)系密切，但在口腔黏膜創(chuàng)傷愈合方面的作用卻需要進(jìn)一步探索。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-to-mesenchymal transition，EMT）過程涉及多種信號分子、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及轉(zhuǎn)錄因子，一旦黏膜愈合與EMT的關(guān)系被進(jìn)一步揭示，將為促黏膜愈合的研究提供新的思路及更多切入點。轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming g

3、rowth factor-β1,TGF-β1）是在誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化方面研究最多的一種生長因子，本實驗設(shè)計觀察大鼠舌黏膜創(chuàng)傷過程中的EMT現(xiàn)象，并初步探討TGF-β1對大鼠舌黏膜創(chuàng)傷愈合及體外培養(yǎng)口腔黏膜上皮細(xì)胞的作用及其與EMT的關(guān)系。
　　方法：實驗一：取7-8周齡 Wistar大鼠,于舌背部黏膜處作一直徑為3mm的圓形缺損模型，分別于術(shù)后0d,1d,2d,3d,4d及創(chuàng)傷完全愈合的第10d處死，HE染色觀察黏膜愈合過程，同時采

4、用免疫組織熒光法檢測 EMT相關(guān)蛋白 E-鈣黏蛋白（E-cadherin，E-cad），波形蛋白（Vimentin）和成纖維細(xì)胞特異性蛋白-1（Fibroblast specific proteins，F(xiàn)SP1）在舌黏膜創(chuàng)傷愈合過程中的表達(dá)。實驗二：動物模型制備同上，術(shù)后創(chuàng)傷局部給藥，大鼠隨機(jī)分為TGF-β1凝膠組，空白凝膠組，空白對照組。術(shù)后0d,2d,4d,6d,8d從每組大鼠中隨機(jī)選擇8只處死，分析比較各組間傷口愈合率差異，間接免

5、疫熒光法觀測上述EMT相關(guān)蛋白。體外培養(yǎng)人類口腔永生化上皮細(xì)胞，劃痕實驗?zāi)M體外創(chuàng)傷觀察比較TGF-β1對劃痕愈合速度的影響。
　　結(jié)果:實驗一：與0d、1d相比，術(shù)后2d-4d大鼠舌黏膜創(chuàng)傷邊緣E-cad表達(dá)減少，而間質(zhì)細(xì)胞特異蛋白Vimentin，F(xiàn)SP1開始在上皮基底層表達(dá)。術(shù)后第10d舌黏膜創(chuàng)傷完全愈合，E-cad表達(dá)量與0d相近，上皮基底層仍可見少量Vimentin，F(xiàn)SP1表達(dá)。實驗二：術(shù)后第4d各組間愈合情況無差異；

6、術(shù)后第8d實驗組TGF-β1凝膠組愈合快于凝膠組和空白對照組（P＜0.05）；實驗組與對照組各時間點，創(chuàng)傷邊緣區(qū)上皮基底層內(nèi)表達(dá)間質(zhì)細(xì)胞表型Vimentin和FSP1細(xì)胞數(shù)目未見明顯差別；細(xì)胞劃痕實驗可見TGF-β1刺激后的HIOEC細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)間質(zhì)樣改變，與空白組比較，劃痕實驗中愈合速度在TGF-β1組更快，其中TGF-β1組在96h已基本愈合。
　　結(jié)論:大鼠舌背部黏膜創(chuàng)傷愈合過程中發(fā)生了EMT現(xiàn)象；TGF-β1能夠使體外培養(yǎng)