漢黃芩素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞胰島素樣生長(zhǎng)因子-1的影響.pdf

1、近年來(lái)研究表明,胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)及其受體(IGF-1R)能參與腫瘤細(xì)胞凋亡調(diào)控,是癌基因及抑癌基因發(fā)揮生物活性的關(guān)鍵環(huán)節(jié),是腫瘤治療的理想靶點(diǎn)。漢黃芩素(wogonin)是從黃芩根中分離出的一種植物源黃酮類化合物,可以阻斷腫瘤細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,是一種非常有前途的、具有多靶點(diǎn)的潛在抗腫瘤藥物。本論文主要研究漢黃芩素的抗乳腺癌作用與IGF-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)系及其作用機(jī)制,旨在為應(yīng)用漢黃芩素對(duì)乳腺癌進(jìn)行預(yù)防、治療和藥理研

2、究提供理論依據(jù)和治療策略。本實(shí)驗(yàn)主要從漢黃芩素體外抗腫瘤作用研究及其對(duì)人乳腺癌細(xì)胞胰島素樣生長(zhǎng)因子-1的影響兩方面進(jìn)行研究。
　　 1.以乳腺癌MCF-7細(xì)胞作為體外模型,噻唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)漢黃芩素對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖活性的影響。應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)定漢黃芩素對(duì)MCF-7細(xì)胞周期分布的影響。通過(guò)檢測(cè)MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)基上清中乳酸脫氫酶釋放率來(lái)考察漢黃芩素的細(xì)胞毒性作用。應(yīng)用相應(yīng)的檢測(cè)試劑盒對(duì)MCF-7細(xì)胞線粒體膜電位和caspa

3、se-3的活性進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示:①漢黃芩素能以劑量和時(shí)間依賴效應(yīng)抑制MCF-7細(xì)胞株的增殖。②漢黃芩素能將細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期,抑制腫瘤細(xì)胞S期的DNA合成,從而誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡。③漢黃芩素能提高線粒體膜的通透性,使線粒體膜電位下降56.55％,促使細(xì)胞色素C從線粒體向胞液中釋放,使caSpase-3的活性提高259.62％,最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。
　　 2.采用MTT比色法測(cè)定細(xì)胞抑制率。流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞周期分布及

4、細(xì)胞凋亡情況。免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)細(xì)胞上清液中IGF-1和IGFBP-3含量的變化。Westernblotting方法檢測(cè)漢黃芩素對(duì)IGF-1介導(dǎo)的PI-3K/Akt途徑和MAPK/Erk1/2信號(hào)傳導(dǎo)途徑的影響。結(jié)果顯示:①漢黃芩素能顯著地抑制IGF-1的促增殖作用,且抑制效果呈明顯的時(shí)間劑量依賴關(guān)系。②漢黃芩素能顯著地抑制IGF-1的抗細(xì)胞凋亡作用,將MCF-7細(xì)胞阻遏在G0/G1期。③漢黃芩素抑制IGF-1分泌的同時(shí)伴