EZH2和MAL基因與口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系.pdf

1、第一部分
　　 目的：口腔黏膜白斑是口腔最普遍和最重要的癌前病損之一，在一定的時間內(nèi)，部分口腔黏膜白斑可以發(fā)展成口腔黏膜鱗癌。為了評價口腔黏膜白斑癌變風(fēng)險，本研究主要探討轉(zhuǎn)錄抑制子EZH2在口腔黏膜鱗癌癌變中的作用；分析是否可以作為口腔黏膜白斑癌變風(fēng)險的預(yù)測指標。
　　 方法：采用免疫組織化學(xué)技術(shù)分析EZH2蛋白在76例口腔黏膜白斑組織包括37例發(fā)生癌變和39例沒有發(fā)生癌變的口腔黏膜白斑組織中的表達；EZH2蛋白的表達與

2、口腔黏膜白斑患者的臨床病理參數(shù)及臨床預(yù)后進行相關(guān)性研究；使用siRNAs沉默口腔黏膜白斑細胞系Leuk-1中EZH2內(nèi)源性的表達，分析EZH2對Leuk-1細胞細胞周期、錨定依賴性和非錨定依賴性的生長和侵襲的影響。
　　 結(jié)果：EZH2蛋白在34例(45％)口腔黏膜白斑組織中強表達，26例(34％)口腔黏膜白斑組織中中度表達和16例(21％)口腔黏膜白斑組織中弱表達或不表達。EZH2蛋白在口腔黏膜白斑組織中強表達與口腔黏膜白斑組

3、織的上皮異常增生(P<0.001)和口腔黏膜白斑癌變風(fēng)險度(P<0.0001)密切相關(guān)。多因素Cox回歸分析顯示EZH2的表達是口腔黏膜白斑癌變風(fēng)險度獨立的預(yù)測指標(P<0.0001)。在口腔黏膜白斑患者被確診后第5年，80％EZH2蛋白強表達的口腔黏膜白斑患者發(fā)生癌變；然而只有24％EZH2蛋白中度表達的口腔黏膜白斑患者發(fā)生癌變；EZH2蛋白表達弱或不表達的患者不發(fā)生癌變。EZH2沉默后能通過調(diào)控Cyclin D1下調(diào)表達和p15IN

4、K4B上調(diào)表達，抑制Leuk-1細胞的增殖、非錨定性生長和侵襲能力。
　　 結(jié)論：EZH2蛋白在口腔黏膜白斑惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮著重要的作用；EZH2蛋白可以作為口腔黏膜白斑癌變風(fēng)險度獨立的預(yù)測指標。
　　 第二部分
　　 目的：為了鑒定和篩選口腔黏膜鱗癌新的、有用的生物標志物，本課題組通過使用全基因組基因芯片技術(shù)，發(fā)現(xiàn)MAL在口腔黏膜鱗癌顯著下調(diào)表達。因此，本研究主要探討MAL在口腔黏膜鱗癌中的下調(diào)機制和MAL對口腔

5、黏膜鱗癌細胞增殖、侵襲和凋亡潛能的影響。
　　 方法：首先，本研究通過使用半定量RT-PCR和實時定量RT-PCR在48對口腔黏膜鱗癌及其配對癌旁組織中驗證MAL的表達情況；通過使用去甲基化劑5-Aza-dC和組蛋白去乙?；种苿㏕SA處理口腔黏膜鱗癌細胞系細胞以及使用亞硫酸氫鹽處理直接測序的方法，評估MAL在口腔黏膜鱗癌細胞和臨床標本中DNA甲基化的水平；口腔黏膜鱗癌細胞系轉(zhuǎn)染MAL的真核表達載體，采用體外細胞增殖實驗、平板克

6、隆形成實驗、細胞周期檢測、凋亡、侵襲和體內(nèi)成瘤實驗，評價MAL在口腔黏膜鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的具體作用。
　　 結(jié)果：與配對的癌旁組織相比，MAL轉(zhuǎn)錄水平在91.7％的口腔黏膜鱗癌臨床標本中顯著下調(diào)(P<0.001)。而且，與正常上皮原代培養(yǎng)細胞相比，MAL轉(zhuǎn)錄水平在口腔黏膜鱗癌細胞系中表達下調(diào)至少5倍以上。分別使用TSA，5-Aza-dC和聯(lián)合使用兩種藥物處理9個口腔黏膜鱗癌細胞系，MAL在44％，67％和89％的口腔黏膜鱗癌細胞

7、系中上調(diào)表達。此外，亞硫酸氫鹽處理DNA直接測序?qū)嶒灡砻鳎琈AL啟動子區(qū)的兩個CpG島M1和M2在口腔黏膜鱗癌細胞系中完全高甲基化(甲基化比率超過90％)；只有CpG島M1在口腔黏膜鱗癌臨床標本中部分高甲基化(甲基化比率在20％到90％)。MAL異位性表達通過G1期阻滯和細胞凋亡抑制口腔黏膜鱗癌細胞的增殖；MAL外源性過表達可以抑制口腔黏膜鱗癌細胞侵襲和移植瘤的生長。
　　 結(jié)論：本研究結(jié)果表明，異常甲基化引起的失活是MAL在口