RHA干擾技術(shù)抑制非小細胞肺癌細胞表皮生長因子受體的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的 構(gòu)建干擾非小細胞肺癌A549細胞表皮生長因子受體表達的四種質(zhì)粒，通過抑制表皮生長因子受體在非小細胞肺癌細胞株內(nèi)的表達，觀察RNA干擾技術(shù)抑制腫瘤細胞生長以及對表皮生長因子受體表達的抑制率，探索肺癌等惡性腫瘤治療的新途徑。 方法 1．根據(jù)RNA干擾的原理，構(gòu)建針對人類表皮生長因子受體的四種質(zhì)粒pSilencer-EGFR Ⅰ、pSilencer-EGFR Ⅱ、pSilencer-EGFRⅢ和 pSilencer-EGFRⅣ；

2、2．將構(gòu)建的四種質(zhì)粒pSilencer-EGFR Ⅰ、pSilencer-EGFR Ⅱ、psilencer-EGFRⅢ、pSilencer-EGFRIV以及psilencer-control分別轉(zhuǎn)染非小細胞肺癌A549細胞，用Hygromycin B篩選得到轉(zhuǎn)染成功的細胞克?。?．采用MTT法檢測抑制A549細胞增殖率；4．采用RT—PCR檢測表皮生長因子受體mRNA表達的抑制率。 結(jié)果1．成功構(gòu)建了針對表皮生長因子受體的四種質(zhì)

3、粒pSilencer-EGFR Ⅰ、pSilencer-EGFR Ⅱ、pSi lencer-EGFRⅢ和 psilencer-EGFRIV；2．成功轉(zhuǎn)染A549細胞，經(jīng)篩選后得到穩(wěn)定表達的細胞克隆； 3．RT—PCR和MTT檢測的結(jié)果表明，質(zhì)粒對表皮生長因子受體mRNA的抑制率達71.2％，細胞增殖抑制率達88.85％。 結(jié)論 結(jié)果表明RNA干擾技術(shù)能有效降解靶基因的mRNA，通過對表皮生長因子受體mRNA的抑制能有效抑制細胞

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