EGCG經(jīng)AKT1-Mdm-2-p53途徑抑制卵巢癌HO-8910細(xì)胞的增殖.pdf

1、目的:卵巢癌是嚴(yán)重威脅我國(guó)婦女健康的三大女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一。化療是治療卵巢癌的重要手段,提高了中晚期卵巢癌患者的緩解率,但許多化療藥物的副作用和耐藥,使部分患者臨床療效難盡人意。本研究旨在探討 EGCG對(duì)卵巢癌 HO-8910細(xì)胞增殖的抑制作用及其機(jī)制,為開(kāi)發(fā)與尋找新的抗卵巢癌藥物提供實(shí)驗(yàn)資料。
　　方法:本研究采用MTT法檢測(cè)EGCG抑制卵巢癌HO-8910細(xì)胞增殖的IC50值;通過(guò)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、平皿克隆形成實(shí)驗(yàn)和軟瓊

2、脂集落形成實(shí)驗(yàn)觀察 EGCG對(duì)HO-8910細(xì)胞增殖的抑制作用;利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)EGCG對(duì)HO-8910細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡的影響;選用RT-PCR檢測(cè)EGCG處理HO-8910細(xì)胞后AKT1、Mdm-2與 p53基因的表達(dá);運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)染色和Western-blot檢測(cè) EGCG處理HO-8910細(xì)胞后AKT1蛋白、Mdm-2蛋白與p53蛋白的磷酸化情況。
　　結(jié)果:(1) MTT結(jié)果顯示EGCG可有效抑制HO-8910細(xì)胞

3、的增殖,其IC50值為64.87mg·L-1(n=3,P<0.05)。(2)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線結(jié)果顯示EGCG可有效抑制HO-8910細(xì)胞的增殖,且呈時(shí)間效應(yīng)關(guān)系(n=3,P<0.05)。(3)平皿克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示65.0 mg·L-1 EGCG(≈IC50值)處理HO-8910細(xì)胞后,克隆體積變小,數(shù)目減少, EGCG對(duì)HO-8910細(xì)胞平皿克隆形成具有抑制作用(n=3,P<0.05)。(4)軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示65.0 mg·L

4、-1EGCG處理HO-8910細(xì)胞后集落體積變小,數(shù)目減少,EGCG對(duì)HO-8910細(xì)胞集落形成具抑制作用(n=3,P<0.05)。(5)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,65.0 mg·L-1 EGCG處理HO-8910細(xì)胞后G1期細(xì)胞比例增加,S期細(xì)胞比例降低,細(xì)胞的凋亡率增加。(6)RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,65.0 mg·L-1 EGCG處理HO-8910細(xì)胞后,AKT1與Mdm-2基因表達(dá)降低,而p53基因的表達(dá)升高(P<0.05)。(

5、7)免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)結(jié)果顯示,p-AKT1蛋白與p-Mdm-2蛋白主要在HO-8910細(xì)胞漿與細(xì)胞核表達(dá);65.0 mg·L-1 EGCG處理HO-8910細(xì)胞后AKT1與Mdm-2蛋白磷酸化水平均降低(P<0.05)。p-p53蛋白在HO-8910細(xì)胞核表達(dá);EGCG處理后p53蛋白磷酸化水平增加(P<0.05)。(8)Western-blotting檢測(cè)結(jié)果顯示,65.0 mg·L-1EGCG處理HO-8910細(xì)胞后AKT1蛋白