加減烏梅丸對(duì)激素干預(yù)后哮喘大鼠氣道炎癥和HPA軸影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、糖皮質(zhì)激素吸入劑已成為支氣管哮喘抗炎治療的基礎(chǔ)藥物，療效確切，副作用小，但臨床上仍有一部分病人需長(zhǎng)期口服較大劑量激素控制病情，停藥或減量均會(huì)導(dǎo)致哮喘加重，此類哮喘被稱為激素依賴型哮喘(SDA)，SDA屬于難治性哮喘范疇。 SDA在撤藥期間表現(xiàn)為氣道炎癥持續(xù)存在和HPA軸的嚴(yán)重受損，炎癥的存在主要由于T淋巴細(xì)胞亞群Th1/Th2比例失衡，即Th1型細(xì)胞功能被抑制，Th2型細(xì)胞處于激活狀態(tài)，后者通過(guò)分泌白介素4(IL-4)、白介素5

2、(IL-5)等細(xì)胞因子促使嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)、肥大細(xì)胞等炎癥細(xì)胞不斷分化、聚集和激活以及IgE的合成，從而使氣道反應(yīng)性持續(xù)增高，同時(shí)大量外源性激素反向調(diào)節(jié)GCRmRNA的轉(zhuǎn)錄水平，使其數(shù)量減少或活性降低，導(dǎo)致患者對(duì)激素的依賴。激素一旦減量或停用即可引起哮喘復(fù)發(fā)，嚴(yán)重甚至導(dǎo)致死亡。因此對(duì)激素依賴型哮喘治療是當(dāng)今研究的熱點(diǎn)，問(wèn)題的關(guān)鍵是尋求既能恢復(fù)因激素大量長(zhǎng)期應(yīng)用而被抑制的HPA軸功能，又能夠調(diào)節(jié)Th1/Th2比值，從而降低氣道高反應(yīng)

3、性，減少激素治療用量，減輕全身性不良反應(yīng)的有效方案，以實(shí)現(xiàn)對(duì)患者生活質(zhì)量的全面提高。 導(dǎo)師武維屏教授多年臨床探索和實(shí)驗(yàn)研究認(rèn)為：陰陽(yáng)兩虛，虛風(fēng)內(nèi)動(dòng)，痰瘀互阻，寒熱錯(cuò)雜是激素依賴型哮喘的基本病機(jī)特點(diǎn)。烏梅丸為《傷寒論》厥陰證主方，該方寒熱并用，氣血雙調(diào)，標(biāo)本兼顧，與SDA病機(jī)特點(diǎn)相吻合，故能使機(jī)體神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)重獲穩(wěn)態(tài)，從而使激素得以撤除，哮喘得以控制。 1.目的本實(shí)驗(yàn)即以上述理論為基礎(chǔ)，通過(guò)對(duì)哮喘模型腹腔注射

4、地塞米松，制備經(jīng)過(guò)激素干預(yù)后的哮喘大鼠模型，通過(guò)研究激素干預(yù)后哮喘模型大鼠在撤藥過(guò)程中及應(yīng)用中西藥治療后氣道炎癥和HPA軸相應(yīng)指標(biāo)的變化情況，揭示激素依賴型哮喘撤減激素過(guò)程中的病機(jī)演變規(guī)律及其內(nèi)在物質(zhì)基礎(chǔ)，探討加減烏梅丸治療SDA的療效機(jī)制及作用環(huán)節(jié)。 2.方法2.1測(cè)定肺功能：用小型動(dòng)物肺功能儀測(cè)定。 2.2ELISA法測(cè)定血漿IFN-γ和IL-4，下丘腦CRH，血漿ACTH及CORT含量。 2.3原位雜交方法

5、測(cè)定肺組織IFN-γ、IL-4、IL-5mRNA表達(dá)。 2.4RT-PCR方法半定量分析肺組織內(nèi)GCRmRNA的表達(dá)。 2.5統(tǒng)計(jì)方法：所有數(shù)據(jù)以x±s表示，組間差異利用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行ANOVA檢驗(yàn)，以P＜0.05差異有顯著性。 3.內(nèi)容3.1加減烏梅丸對(duì)激素干預(yù)后哮喘模型大鼠肺功能和肺組織形態(tài)學(xué)的影響研究3.2加減烏梅丸對(duì)激素干預(yù)后哮喘模型大鼠IFN-γ和IL-4含量及其mRNA表達(dá)的影響研究3

6、.3加減烏梅丸對(duì)激素干預(yù)后哮喘模型大鼠IL-5mRNA表達(dá)的影響研究3.4加減烏梅丸對(duì)激素干預(yù)后哮喘模型大鼠HPA軸功能及GCRmRNA的影響研究4.結(jié)果與結(jié)論4.1一般生活狀態(tài)變化：與激素干預(yù)組比較，在撤前，加減烏梅丸組的呼吸急促，節(jié)律不齊和幅度不規(guī)整等癥狀明顯減輕，類似于普米克組；在撤中和撤后，加減烏梅丸組呼吸道癥狀基本控制，而普米克組呼吸道癥狀雖被控制，卻有不同程度的四肢發(fā)涼，口鼻、眼眶、尾尖紫紺明顯，毛發(fā)粗糙少澤，喜群臥不喜動(dòng)等

7、癥，此類癥狀在加減烏梅丸組明顯改善。 4.2肺功能和病理學(xué)改變：與激素干預(yù)組比較，加減烏梅丸組第2周時(shí)哮喘癥狀和肺通氣功能明顯改善(P＜0.05)；撤中和撤后肺功能顯著改善(P＜0.01)，支氣管粘膜上皮排列基本整齊，管腔內(nèi)炎性滲出物很少，管壁附近及肺泡間隔未見(jiàn)明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，偶見(jiàn)嗜酸性粒細(xì)胞。 4.3大鼠血清IL-4、IFN-γ含量及其在肺組織中mRNA的表達(dá)：與激素干預(yù)組比較，加減烏梅丸組在撤前炎癥明顯減輕，但效果

8、略次于普米克組(P＞0.05)；在撤中和撤后兩組均能顯著下調(diào)IL-4含量及mRNA的陽(yáng)性表達(dá)(P＜0.01)，并能升高IFN-γ含量及mRNA的陽(yáng)性表達(dá)(P＜0.05)，與正常組相比無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。說(shuō)明加減烏梅丸通過(guò)整體調(diào)節(jié)機(jī)體陰陽(yáng)，能明顯良性調(diào)節(jié)IL-4/IFN-γ比例，其抗炎作用在撤前與普米克相似，在撤中和撤后能穩(wěn)定病情，使炎癥病情逐步趨于好轉(zhuǎn)，其療效近似于普米克組(P＞0.05)。 4.4大鼠肺組織中IL-5

9、mRNA的表達(dá)：與激素干預(yù)組比較，加減烏梅丸在撤前能明顯降低大鼠肺組織中IL-5mRNA的陽(yáng)性表達(dá)，在撤中和撤后仍顯著降低大鼠肺組織中IL-5mRNA的陽(yáng)性表達(dá)，與普米克組、正常組相比無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。從另一側(cè)面說(shuō)明加減烏梅丸具有明顯的抗炎作用。 4.5大鼠下丘腦CRH、血清ACTH、CORT含量及肺組織GCRmRNA表達(dá)：與激素干預(yù)組比較，加減烏梅丸在撤前、撤中、撤后有逐步升高CRH、ACTH、CORT含量和GCR