腫瘤壞死因子-α可溶性受體對矽肺纖維化的干預(yù)研究.pdf

1、目的：本研究以大鼠矽肺動物模型為研究對象，通過測定矽肺相關(guān)生物活性介質(zhì)并確定相關(guān)介質(zhì)致纖維化的節(jié)點。初步探討腫瘤壞死因子α(tumor necrosis a factor，TNF-α)可溶性受體對二氧化硅(silicon dioxide，SiO2)粉塵致大鼠肺纖維化的防治作用以及相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響。 方法：根據(jù)隨機(jī)化原則將大鼠分為3個實驗組，即對照組(control group，CL)、染矽塵組(silica-instill

2、ed group，SA)、干擾組(intervention group，IN)，對照組、染矽塵組每組48只，干擾組10只。對照組大鼠氣管內(nèi)注入生理鹽水，染矽塵組大鼠氣管內(nèi)注入矽塵混懸液1ml(50mg/ml)，干擾組大鼠氣管內(nèi)注入矽塵混懸液1ml(50mg/ml)后于1、5、8d給予500ug TNF-α可溶性受體皮下注射。氣管暴露法建立大鼠矽肺模型，模型建立后，對照組、染矽塵組于1d、3d、7d、14d、21d、28d 6個時間點分別

3、取8只大鼠將其處死。干擾組于7d、14d 2個時間點取5只大鼠處死。HE染色觀察大鼠肺組織形態(tài)學(xué)的變化。血細(xì)胞計數(shù)儀測定支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞總數(shù)。天狼猩紅染色法結(jié)合偏振光顯微鏡觀察肺組織Ⅰ、Ⅲ型膠原合成。用Image-Pro Plus Version 4.5 for windows TM圖象分析系統(tǒng)對圖像進(jìn)行分析。一氧化氮(nitrogen monoxidum，NO)測定采用南京建成生物工程研究所NO試劑盒。酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme

4、-labeledimmunosorbent assay，EIASA)檢測對照組、染矽塵組和干擾組各時間點外周血核因子kB(nuclear factor kB，NF-kB)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)、白介素(interleukin-1，IL-1β)、TNF-α等4種生物活性介質(zhì)表達(dá)水平。所有數(shù)值均用-x士s表示，兩組間采用t檢驗，不同組間的比較用單因素方差分析的LSD法，

5、全部數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)處理均采用SPSS 15.0 for windows分析軟件。 結(jié)果： 1.HE染色法證實氣管暴露注入SiO2粉塵懸液成功建立矽肺模型。 2.TNF-α可溶性受體對染矽塵大鼠肺臟器系數(shù)的影響。與對照組比較，染矽塵組大鼠7d以后各時間點肺臟器系數(shù)高于對照組(P＜0.05)；與染矽塵組比較，干擾組大鼠各時間點肺臟器系數(shù)低于染矽塵組，但高于對照組，差異有顯著性(P＜0.05)。 3.TNF-α可

6、溶性受體對染矽塵大鼠肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)白細(xì)胞總數(shù)的影響。與對照組比較，染矽塵組相應(yīng)時間點BALF白細(xì)胞總數(shù)均不同程度增高，在14d、21d、28d具有顯著性差異(P＜0.01)；與染矽塵組比較，干擾組各相應(yīng)時間點BALF白細(xì)胞總數(shù)均小于染矽塵組，在14d差異有顯著性(P＜0.05)。 4 TNF-α可溶性受體對染矽塵大鼠I、III型膠原合成的影響。與對照組比較，染矽塵

7、組7d、14d、21d、28d I型膠原均高于對照組，差異有顯著性(P＜0.01)；與染矽塵組比較，干擾組各時間點I膠原低于染矽塵組組，在14d差異有顯著性(P＜0.05)。與對照組比較，染矽塵組各時間點III膠原在21d時上升陡然趨緩，僅在7d、14d、21d時有顯著性差異(P＜0.01)；與染矽塵組比較，干擾組各時間點Ⅲ膠原均低于染矽塵組，但儀在14d差異有顯著性(P＜0.05)。 5 TNF-α可溶性受體對染矽塵大鼠外周血

8、清NO表達(dá)的影響。與對照組比較，染矽塵組各時間點外周血清NO的濃度均高于對照組(P＜0.01)，在7d、14d、21d、28d具有顯著性差異(P＜0.05)；與染矽塵組比較，干擾組各時間點外周血清NO濃度低于染矽塵組，在14d時差異有顯著性(P＜0.05)。 6 TNF-α可溶性受體對染矽塵大鼠外周血清IL-1β表達(dá)的影響。與對照組比較，染矽塵組各時間點外周血清IL-1β的濃度均高于對照組(P＜0.01)，但僅在3d、7d時有顯

9、著性差異(P＜0.05)。與染矽塵組比較，干擾組各時間點外周血清IL-1β濃度低于染矽塵組，在7d時差異有顯著性(P＜0.01)。 7 TNF-α可溶性受體對染矽塵大鼠外周血清TGF-β表達(dá)的影響。與對照組比較，染矽塵組在14d、21d、28d時外周血清TGF-β的濃度高于對照組(P＜0.01，P＜0.05)，其表達(dá)高峰在染矽塵后的第21d；與染矽塵組比較，干擾組各時間點外周血清TGF-β濃度低于染矽塵組，在14d時差異有顯著性

10、(P＜0.05)。 8 TNF-α可溶性受體對染矽塵大鼠外周血清NF-kB表達(dá)的影響。與對照組比較，染矽塵組各時間點外周血清NF-kB的濃度均高于對照組(P＜0.01，P＜0.05)，其表達(dá)高峰在染矽塵后的第21d；與染矽塵組比較，干擾組各時間點外周血清NF-kB濃度低于染矽塵組，差異有顯著性(P＜0.05)。 9 TNF-α可溶性受體對染矽塵大鼠外周血清TNF-α表達(dá)的影響。染矽塵組與干擾組各時間點外周血清TNF-α的

11、濃度比較無統(tǒng)計學(xué)意義；與染矽塵組比較，干擾組各時間點外周血清TNF-α濃度低于染矽塵組，但差異無顯著性。 結(jié)論：本研究認(rèn)為： 1.大鼠支氣管內(nèi)滴入矽塵可引起大鼠肺組織炎性和纖維化性病理變化，并有矽結(jié)節(jié)形成。 2.TNF-α可溶性受體可以緩解矽塵誘導(dǎo)的大鼠肺臟器系數(shù)的增加。 3.TNF-α可溶性受體對矽塵誘導(dǎo)的大鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)的顯著增加有抑制作用。 4 TNF-α可溶性受體能夠抑制矽塵誘導(dǎo)的大