miR-21對SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞治療心肌梗死的實驗研究.pdf

1、目的：通過過表達或抑制microRNA-21(miR-21)在SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞SD-BMSCs(MSCs)內(nèi)的表達，評估其在治療心肌梗死的效果上的變化，并研究其作用機制。
　　方法：采用全骨髓差異貼壁法分離培養(yǎng)SD大鼠MSCs至第4代，使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染miR21-agomir（過表達）及miR-21 antagomir（抑制）調(diào)控miR-21在MSCs內(nèi)的表達，轉(zhuǎn)染成功后收集細胞并收集條件培養(yǎng)基，用于后續(xù)研究。體內(nèi)實驗

2、中，建立SD大鼠心肌梗死模型后，采用心肌內(nèi)注射方法，分別將MSCsmiR-21 agomir組、MSCsmiR-21 antagomir組、MSCs未轉(zhuǎn)染組及PBS移植至心梗及周邊區(qū)域，通過檢測大鼠心梗后心功能變化及心梗面積評估治療效果。體外實驗中，購買原代臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)，心肌細胞系H9C2細胞，子宮頸癌細胞系Hela細胞。以Hela細胞為載體，通過雙熒光素酶報告驗證miR-21的靶點是否為Jagged1。同時利用收集的M

3、SCs轉(zhuǎn)染組產(chǎn)生的培養(yǎng)基和MSCs未轉(zhuǎn)染組產(chǎn)生的培養(yǎng)基及含有10％FBS+雙抗的DMEM/HIGH培養(yǎng)基（空白對照），用作以下兩個實驗，一是處理HUVEC細胞72小時后在Matrigel基質(zhì)膠上培養(yǎng)，于12小時觀察成管樣結(jié)構(gòu)；二是處理H9C2細胞72h后加入CCK-8溶液孵育1個小時，檢測細胞增殖情況。
　　結(jié)果：體內(nèi)實驗中: MSCsmiR-21antagomir組平均LVEF(%)變化值：17.14±2.63, MSCs mi

4、R-21 agomir組LVEF(%)變化值:13.09±1.74,MSCs未轉(zhuǎn)染組LVEF(%)變化值:13.34±2.25,三組與對照組LVEF(%)變化值:7.09±4.23相比，心功能恢復(fù)效果更佳，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),三組之中，MSCsmiR-21antagomir組與心功能恢復(fù)效果最佳，與其他兩組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。通過Masson染色分析心梗面積發(fā)現(xiàn)心梗區(qū)域纖維化組織與正常心肌面積所占橫截面外

5、周徑比值(%):MSCsmiR-21 antagomir組最小，為10.50±3.15，與MSCsmiR-21 agomir15.91+4.12、MSCs未轉(zhuǎn)染組20.34±3.25、PBS組37.09±6.23均有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。心梗區(qū)域纖維化組織與正常心肌面積所占橫截面面積比值(%) MSCsmiR-21 antagomir組同樣最小，為8.31±2.35,與MSCsmiR-21 agomir組19.91+4.93、MS

6、Cs普通組25.14±2.19、PBS組31.04±5.93均有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。通過雙熒光素酶報告基因驗證，我們發(fā)現(xiàn)miR-21可與Jagged1的mRNA3’UTR段結(jié)合，說明miR-21對Jagged1具有調(diào)控作用。qRT-PCR顯示，轉(zhuǎn)染miR-21 antagomir的MSCs內(nèi)的Jagged1、NOTCH、VEGF等基因全部上調(diào)。體外管樣生成實驗中，MSCsmiR-21 agomir培養(yǎng)基組體外管樣結(jié)構(gòu)連接長度(1

7、1976.14±866.62)與MSCsmiR-21 antagomir培養(yǎng)基組(12196.52±858.00)、MSCs未轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基組(12275.09±561.74)之間均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，但三組與空白組之間均有統(tǒng)計學差異(P<0.01)；CCK8實驗中，抑制了miR-21在MSCs內(nèi)的表達后，其條件培養(yǎng)基促心肌增殖的能力得到了明顯的增強。
　　結(jié)論：抑制了miR-21在MSCs內(nèi)的表達后，其治療心肌梗死的能力得