甘草調(diào)和諸藥的配伍機(jī)制及保肝作用研究.pdf

1、目的:本研究首先從分子水平上考察甘草中的主要單體成分甘草酸對人HepG2細(xì)胞中細(xì)胞色素P450 3A4酶在轉(zhuǎn)錄及蛋白水平表達(dá)的影響，并且對其誘導(dǎo)細(xì)胞色素P450 3A4酶的調(diào)控機(jī)制進(jìn)行初步探討。同時(shí)觀察了甘草及甘草酸對石膽酸所致小鼠肝損傷的保護(hù)作用，為中藥甘草調(diào)和諸藥，保肝解毒的理論提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法: RT-PCR及Western-blot技術(shù)分別用于檢測甘草酸對CYP3A4 mRNA及蛋白表達(dá)的影響；瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染熒光素

2、酶報(bào)告基因和凝膠電泳遷移技術(shù)（EMSA）用于甘草酸對CYP3A4 誘導(dǎo)表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究；利用過量石膽酸造成小鼠肝臟損傷的病理模型觀察甘草及甘草酸對肝臟損傷的保護(hù)作用。
　　 結(jié)果: RT-PCR結(jié)果顯示，甘草酸能濃度和時(shí)間依賴性地使HepG2細(xì)胞中CYP3A4 mRNA的表達(dá)上調(diào)。同時(shí)，Western-blot結(jié)果顯示，HepG2細(xì)胞在給予甘草酸后CYP3A4 蛋白的表達(dá)也呈濃度依賴性的升高，與mRNA水平變化相一致。報(bào)告基因

3、和EMSA結(jié)果顯示，甘草酸可通過直接激活PXR受體，進(jìn)而誘導(dǎo)CYP3A4基因及蛋白表達(dá)的增加。整體動物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，甘草及甘草酸各劑量組能有效逆轉(zhuǎn)LCA所致肝損傷小鼠外周血ALT及AST的升高，組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，小鼠在給予甘草和甘草酸后，肝細(xì)胞的壞死程度得到明顯改善，而甘草和甘草酸對LCA所致小鼠肝損傷的保護(hù)作用可能與其調(diào)控LCA合成及代謝的關(guān)鍵基因SHP，CYP7A1及CYP3A11的表達(dá)有關(guān)。
　　 結(jié)論:甘草酸具有對CYP

4、3A4酶的誘導(dǎo)效應(yīng)，可能產(chǎn)生基于藥物代謝酶的草藥-化學(xué)藥之間的相互作用 (herb-drug interaction)；甘草調(diào)和諸藥的配伍機(jī)制可能與其參與對細(xì)胞色素P450 3A4的誘導(dǎo)表達(dá)進(jìn)而使與其同服的其它中藥或中藥復(fù)方中的毒性成分的代謝加速而起到緩和藥性，進(jìn)而達(dá)到調(diào)和諸藥的目的，而對CYP3A4的誘導(dǎo)表達(dá)作用可能是通過甘草-PXR-CYP3A4核受體激活途徑來發(fā)揮效應(yīng)的。 同時(shí)利用過量石膽酸造成的肝損傷模型，為進(jìn)一步探討其保肝解毒