苦參毛狀根及愈傷組織培養(yǎng)研究.pdf

1、苦參(Sophora flavescens Ait)為豆科(Leguminosae)槐屬(SophoraLinn)落葉灌木,是我國(guó)傳統(tǒng)中藥之一。主要分布在山西、陜西、北京、黑龍江、甘肅、河北、湖南、廣西、四川等地?？鄥⒕哂星鍩嵩餄瘛⑾x(chóng)、利尿等功能。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明,苦參中的苦參堿和氧化苦參堿具有良好的抗癌活性,對(duì)黑色素瘤、膀胱癌、胃癌等均有不同程度的抑制作用,目前以苦參和其有效成分為原料開(kāi)發(fā)了多種制劑并廣泛用于臨床。苦參生長(zhǎng)周期需2-

2、3年,加之苦參制劑的深度開(kāi)發(fā),苦參藥材的市場(chǎng)需求量不斷增加,其價(jià)格由2003的2.5元漲到2011的14元左右,在近幾年內(nèi)翻了4倍多,突顯了苦參資源可持續(xù)發(fā)展的問(wèn)題。本論文開(kāi)展苦參毛狀根培養(yǎng)體系研究,為解決苦參資源問(wèn)題探索新途徑。
　　 本論文研究了苦參毛狀根的誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)條件及苦參愈傷組織的誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)條件;并采用高效液相色譜分析法,對(duì)苦參毛狀根及愈傷組織中苦參堿及氧化苦參堿含量進(jìn)行了測(cè)定。研究結(jié)果如下:
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3、.高效液相色譜法測(cè)定苦參堿及氧化苦參堿含量的色譜條件為:色譜柱:氨基柱(HypersilNH24.6mm×250mm,5μm,柱號(hào):E2021505,批號(hào):9347);流動(dòng)相:乙腈-無(wú)水乙醇-3%磷酸(84:8:8);檢測(cè)波長(zhǎng):220nm;流速:1mL/min;進(jìn)樣量:15μL;柱溫:室溫。
　　 1)在所述條件下,苦參堿的保留時(shí)間為10.2min?？鄥A在10.0～240.0μg/mL范圍內(nèi),線(xiàn)性關(guān)系良好(r=0.9990),

4、加樣回收率為97.21%,RSD為1.75%。
　　 2)在所述條件下,氧化苦參堿的保留時(shí)間為15.9min。氧化苦參堿在10.0～240.0μg/mL的范圍內(nèi),線(xiàn)性關(guān)系良好(r=0.9995),加樣回收率為99.12%,RSD為1.90%。
　　 2.苦參毛狀根的最佳誘導(dǎo)條件為:以幼芽為外植體,在R1601菌液中添加100umol/L乙酰丁香酮,侵染20min,MS培養(yǎng)基,25±1℃暗培養(yǎng)2d?？鄥⒚珷罡恼T導(dǎo)率為28

5、.6%。
　　 3.苦參毛狀根繼代培養(yǎng)條件:以改良的1/2MS為培養(yǎng)基,蔗糖為碳源,此條件下苦參毛狀根生長(zhǎng)較好。苦參毛狀根中氧化苦參堿的富集量為1.79mg/g(苦參毛狀根干重),未檢測(cè)到苦參堿。
　　 4.苦參愈傷組織最佳誘導(dǎo)條件:以苦參幼芽為外植體,培養(yǎng)基MS+1.0mg/L2,4-D+1.0mg/L6-BA+1.0mg/LNAA中25±1℃條件下暗培養(yǎng);以苦參幼芽、根、莖、葉片為外植體,其愈傷組織的誘導(dǎo)率分別為94

6、.12%、74.19%、35.71%、23.08%。
　　 5.苦參愈傷組織最佳增殖條件:培養(yǎng)基MS+0.5mg/L2,4-D+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA,培養(yǎng)溫度為25±1℃,黑暗培養(yǎng);此條件下其增殖率為25.3%。
　　 不同激素組合對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率的影響不大,但對(duì)其增殖率的影響較大,其中激素NAA具有顯著影響。
　　 對(duì)苦參愈傷組織中苦參堿及氧化苦參堿的研究表明,苦參愈傷組織中苦參堿的誘導(dǎo)