糖原合成酶激酶-3β信號通路介導海馬CA1區(qū)長時程增強的氧化性調(diào)節(jié)作用.pdf

1、華中科技大學博士學位論文糖原合成酶激酶3β信號通路介導海馬CA1區(qū)長時程增強的氧化性調(diào)節(jié)作用姓名：蔡飛申請學位級別：博士專業(yè)：藥理學指導教師：陳建國20080501華中科技大學博士學位論文華中科技大學博士學位論文III第二部分第二部分GSK3β信號通路參與海馬信號通路參與海馬CA1區(qū)長時程增強的區(qū)長時程增強的氧化性調(diào)節(jié)氧化性調(diào)節(jié)目的：目的：糖原合成酶激酶3β(glycogensynthasekinase3GSK3β)是一種多功能的絲氨酸

2、蘇氨酸蛋白激酶，在氧化應激所致的神經(jīng)退行性疾病如AD中起著重要的作用；并且GSK3β參與了海馬CA1區(qū)突觸可塑性的調(diào)節(jié)。本實驗是在第一部分研究氧化還原劑對海馬CA1區(qū)LTP影響的基礎上，進一步闡明GSK3β這種AD相關的絲氨酸蘇氨酸激酶是否參與這種氧化調(diào)節(jié)過程。方法：方法：采用細胞外場電位記錄和WesternBlot的方法研究GSK3β在氧化還原劑調(diào)節(jié)海馬CA1區(qū)LTP中的作用。結果：結果：高頻刺激能夠引起GSK3β位點中ser9的磷酸

3、化增加，但總的GSK3β不變。在CHT的作用下，高頻刺激后GSK3β中ser9的磷酸化與總的GSK3β比值和高頻刺激組相比降低，與之相反，在DTT作用下，高頻刺激后GSK3β中ser9的磷酸化與總的GSK3β比值和高頻刺激組相比升高。而DTNB或TCEP對高頻刺激后GSK3β中ser9的磷酸化與總的GSK3β比值無明顯影響。為進一步研究GSK3β的失活是否參與氧化還原劑對LTP的調(diào)節(jié)，采用電生理記錄的方法研究GSK3β抑制劑氯化鋰（Li

4、Cl）對氧化還原劑調(diào)節(jié)LTP的影響。LiCl能夠完全逆轉(zhuǎn)CHT對LTP的抑制作用，而預先孵育LiCl能夠增加LTP的強度，與單獨給予DTT的結果很相似。進一步分析發(fā)現(xiàn)預先孵育LiCl后再給予DTT所導致LTP的增加與單獨給予LiCl后LTP的增加間無明顯差異。采用WesternBlot的方法研究單獨給予LiCl或同時給予LiCl和氧化還原劑時GSK3β活性的變化。結果發(fā)現(xiàn)LiCl可逆轉(zhuǎn)CHT所致的GSK3β磷酸化減少；LiCl和DTT都