‘金冠’果實采后成熟衰老過程中的蛋白表達研究.pdf

1、本研究以‘金冠’果實為試驗材料，運用雙向電泳技術和串聯質譜技術對不同成熟階段蘋果果實進行差異蛋白質組學研究，通過對差異表達蛋白功能鑒定和蛋白圖譜變化的生物信息學分析，深入探討蘋果果實成熟衰老的機理，為果實品質改良以及采后的品質調控提供理論依據。主要研究結果如下:
　　1.建立了適合蘋果果實總蛋白質分離的雙向電泳體系。以改良的酚抽法提取總蛋白，用17 cm pH4-7的IPG膠條進行等電聚焦電泳，聚焦時間為60000 VH，使用12

2、％的SDS-PAGE進行垂直電泳分離蛋白，并采用膠體考馬斯亮藍G-250染色，獲得了分辨率高、重復性好、蛋白點清晰、總蛋白點達400以上的雙向電泳圖譜;這些蛋白點主要分布在pH5～7，分子量15kDa～95kDa之間。該體系的建立為后續(xù)的蘋果果實蛋白質組學的研究和分析奠定了基礎。
　　2.以‘金冠’蘋果果實為試材，采用建立的雙向電泳技術對蘋果進行差異蛋白質組學的分析，結果顯示不同成熟階段和貯藏期‘金冠’果實的蛋白質圖譜存在顯著差異

3、。
　　用PDQuest軟件對以雙向電泳圖譜進行分析獲得了55個差異點，經串聯質譜和數據庫檢索成功鑒定出53個2-fold以上的蛋白差異點。這些蛋白根據其功能可分為6類，包括脅迫反應和防御(49.0％)、能量和代謝(34.0％)、成熟和衰老(5.6％)、信號傳導(3.8％)、細胞結構(3.8％)和蛋白合成(3.8％);其中與脅迫反應和防御相關的蛋白所占比例最大，其次是能量和代謝中的蛋白。差異表達蛋白亞細胞定位結果顯示，53個差異蛋