人羊膜上皮細胞移植治療創(chuàng)傷性脊髓損傷的移植免疫研究.pdf

1、目的：脊髓損傷的治療一直是醫(yī)學的研究熱點，脊髓損傷后自身的修復能力非常有限，而死亡的神經元不能由周圍神經元代替且神經元再生能力極弱，如何實現(xiàn)脊髓損傷后神經再生與修復一直是該領域的難點和熱點。脊髓損傷后留有嚴重的殘疾給患者帶來極大的痛苦，近年來，隨著干細胞研究的進展，給患者帶來神經功能重建的希望。隨著研究的進展，各種干細胞陸續(xù)出現(xiàn)并取得一定的研究成果，同時，也發(fā)現(xiàn)不同細胞在移植治療脊髓損傷方面存在的各種局限性。比如，細胞移植后由于免疫排斥

2、反應導致的一系列并發(fā)癥，或隨年齡老化而致干細胞含量及其增殖能力顯著降低，存在倫理問題，等等。本研究旨在通過對人羊膜上皮細胞與研究較多的骨髓間充質干細胞移植后移植免疫情況作對比，來揭示人羊膜上皮細胞移植治療創(chuàng)傷性脊髓損傷在移植免疫方面的優(yōu)勢。
　　方法：1、將人羊膜上皮細胞與骨髓間充質細胞培養(yǎng)解凍，置于培養(yǎng)基中于37℃、5%CO2溫箱中培養(yǎng)。
　　2、將21只SD大鼠（體質量250～300g，7周齡）顯微鏡下半橫斷脊髓建立動物

3、模型，脊髓橫斷后，立即將預先調適細胞密度的 HAECs、BMSC、PBS分別植入各分組大鼠的橫斷部位；設羊膜上皮細胞移植組、骨髓間充質細胞移植組、PBS液對照組三組。
　　3、細胞植入后每3天進行一次Basso Beattie Bresnahan運動功能評分（BBB評分），評價后肢運動功能恢復情況，持續(xù)2個月，根據(jù)BBB評分變化情況來觀察大鼠肢體功能恢復趨勢。
　　4、在細胞移植后一周和三個月，各組分別隨機選取2只大鼠，在損

4、傷部位手術切取損傷段脊髓，于4%多聚甲醛固定液中固定24 h后行石蠟包埋，利用免疫組織化學法標記CD3+T細胞并在顯微鏡下觀察T細胞浸潤情況。選取CD3陽性細胞最多處，每張切片隨機選擇5個高倍視野（×400）下進行陽性細胞計數(shù)。
　　5、分別于細胞植入后1周、1個月、2個月、3個月時抽取靜脈血并分離血清。用ELISA法測定大鼠血清IL-2和IL-10 OD值，觀察二者變化情況。
　　結果：1、兩種細胞具有相似的生長周期與規(guī)律

5、。羊膜上皮細胞呈圓形或橢圓形，核大，胞質中富有脂肪滴。
　　2、BBB評分顯示，三組大鼠在移植后三周內均有較快恢復并在三周后進入平臺期，細胞移植組恢復更明顯且羊膜上皮細胞組優(yōu)于骨髓間充質細胞組（P<0.05）。
　　3、CD3免疫組化顯示各組切片在早期均有 CD3+細胞浸潤，移植后三個月羊膜上皮細胞組CD3+細胞浸潤明顯少于骨髓間充質細胞組（P<0.05）。
　　4、羊膜上皮細胞組大鼠血清 IL-2的水平較骨髓間充質細