龍葵與血管內皮細胞生長因子(VEGF)抗體對人大腸癌血管生成的影響.pdf

1、目的和背景：
　　實驗研究大腸癌雞胚移植模型中,龍葵與 VEGF抗體表達以及兩者共同對大腸癌血管生成的影響。比較龍葵與VEGF抗體作用在雞胚絨毛尿囊膜上,人大腸腫瘤新生血管的面積及密度的差異;同時應用免疫組化法檢測血管內皮細胞生長因子(VEGF)的表達。免疫組化法檢測CD34抗體(細胞表面的唾液粘蛋白)表達情況得出腫瘤微血管密度,應用 LEICA圖像采集處理分析軟件反映雞胚血管新生情況有無差異,分析龍葵與VEGF抗體對雞胚移植模型

2、中人大腸癌促血管生長這一機制的抑制作用。
　　龍葵:一年生草本植物,全草含龍葵堿、澳洲茄堿、澳洲茄邊堿等多種生物堿,民間較早就作為抗腫瘤藥應生成的影響。腫瘤的血管生成這一觀點由 Folkman[1]于1971年首次提出,認為腫瘤生長與腫瘤血管生成密切相關。龍葵屬茄科,臨床發(fā)現(xiàn)對多種實體腫瘤及白血病等具有良好的防治療效,近年來國內外開始涉足其抗腫瘤作用的有效成分和作用機制。龍葵堿可以通過改變膜蛋白的數(shù)量、功能、膜的通透性及 ATP酶

3、的活性等多個環(huán)節(jié)來改變細胞膜結構與功能,從而達到抗腫瘤的作用。研究發(fā)現(xiàn)龍葵糖蛋白對 HT-29(人大腸癌細胞)、MCF-7(人乳腺癌細胞)、HCT-116(人直腸癌細胞)等多種腫瘤細胞具有細胞毒和促細胞凋亡作用。新近的研究表明龍葵提取物在促進腫瘤細胞凋亡時能增加細胞內 NO的合成,這可能是促進細胞凋亡的機制之一[2]。應用激光共聚焦顯微術(LCM)觀察龍葵堿能明顯降低 S180和 H22荷瘤小鼠細胞RNA/DNA值,使腫瘤細胞內DNA轉

4、錄形成RNA的代謝受到抑制,細胞內基因產(chǎn)物——蛋白質的合成受阻[3]。研究比較抑制正常發(fā)育血管,龍葵組龍葵量在15 mg時對血管新生的抑制作用不明顯,而當龍葵量達25 mg時,雞胚的發(fā)育受到明顯抑制或死亡,8只雞胚樣本中出現(xiàn)5只雞胚死亡。當龍葵給藥量為20 mg時,給藥48h后可見成形的胚胎活動,CAM上的給藥載體旁邊出現(xiàn)一個缺少血管的區(qū)域。龍葵總提取物對 U266(多發(fā)性骨髓瘤細胞) G0-Gl期細胞數(shù)減少,S、G2-M期細胞數(shù)增加[

5、4]。龍葵醇提物可明顯延長荷瘤肝癌小鼠生存時間,抑制肉瘤的生長[5]。龍葵具有清熱解毒、活血消腫、利水通淋的功效,臨床上用龍葵水煎劑或注射劑治療宮頸癌、食道癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、絨毛膜上皮癌、卵巢癌、肉瘤等多種惡性腫瘤,均取得了一定的療效[6]。龍葵可明顯抑制雞胚絨毛尿囊膜血管新生[7]。實驗表明低能量激光照射聯(lián)合龍葵多糖可以抑制腫瘤細胞中VEGF的生成,導致血管生成的環(huán)節(jié)受到抑制,腫瘤組織血管生成減少,阻斷腫瘤生長所需營養(yǎng),抑制腫瘤

6、細胞生長、侵襲、轉移[8]。但是,龍葵是否具有抑制大腸癌新生血管的作用,至今還沒有相應的研究,對內皮細胞的相關作用還未見報道。
　　方法：
　　以9日齡的雞胚為模型,移植人結腸癌HT-29細胞于雞胚絨毛尿囊膜(CAM)上,孵箱培養(yǎng)1日后分別加入龍葵堿溶液(實驗組1)、VEGF抗體(實驗組2)及無菌PBS溶液(對照組),繼續(xù)培養(yǎng)5日,觀察移植瘤雞胚絨毛尿囊膜新生血管生成情況,測量其微血管密度、微血管面積。萊卡立體顯微鏡拍照存檔

7、,用 Image proplus6.0軟件分別分析實驗組、對照組雞胚絨毛尿囊膜微血管面積;將石蠟包埋的雞胚絨毛尿囊膜移植瘤病理切片,采用 SP兩步法作免疫組化,檢查腫瘤組織的CD34抗原標記的微血管密度;SPASS17.0軟件分析計算各組間微血管面積。
　　結果：
　　通過對實驗數(shù)據(jù)分析,實驗組1、實驗組2與對照組間微血管面積及微血管密度間存在明顯差異,P<0.05,有統(tǒng)計學意義;實驗組1與實驗組2間存在明顯差異,P<0.0