青蒿琥酯聯(lián)合甲氨蝶呤、雷公藤多苷對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎及滑膜PANKL、OPG表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察青蒿琥酯及其聯(lián)合甲氨蝶呤、雷公藤多苷對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎（Ajuvant Arthritis，AA）的骨保護(hù)作用。
　　 方法：選擇體重170～200g的雄性Wistar大鼠，測(cè)量雙側(cè)足爪容積后，于其右后足跖部常規(guī)消毒后皮內(nèi)注射完全弗氏佐劑（0.1ml/只）建立AA模型，造模后第21天，將出現(xiàn)二次反應(yīng)的大鼠隨機(jī)分成模型組、甲氨蝶呤治療組（1mg/kg.d）、青蒿琥酯治療組（80mg/kg.d）、雷公藤多苷組（8mg/kg

2、.d），甲氨蝶呤+青蒿琥酯治療組（1mg/kg.d+80mg/kg.d）、青蒿琥酯+雷公藤多苷治療組（80mg/kg·d+8mg/kg.d），每組8只，另隨機(jī)取8只正常Wistar大鼠為空白對(duì)照組，當(dāng)日用容積測(cè)量?jī)x測(cè)量各組大鼠左后足足爪容積。治療各組連續(xù)灌胃給藥14天。于給藥后第15天測(cè)量各組大鼠足爪容積后，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血，離心，取血清，低溫冰箱保存?zhèn)錂z，酶聯(lián)免疫吸附分析法測(cè)量大鼠血清中TNF-α、IL-1β、RANKL、OPG含量。采

3、血后摘取踝關(guān)節(jié)進(jìn)行固定、脫鈣、石蠟包埋。HE染色，光鏡下觀察關(guān)節(jié)病理變化并進(jìn)行評(píng)分。免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)關(guān)節(jié)滑膜RANKL和OPG的表達(dá)，采用計(jì)算機(jī)圖像分析方法對(duì)其表達(dá)進(jìn)行定量分析。應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.各組大鼠一般狀態(tài)及體重的變化：AWT+TG組的情況最好，大鼠的精神狀態(tài)佳、飲食好，活動(dòng)好，體重不斷增加。雖然MTX組、MTX+ART組后期關(guān)節(jié)癥狀較模型組明顯減輕，但體重增加不明顯

4、，MTX+ART組有2只大鼠出現(xiàn)腹瀉。給藥后14天大鼠體重對(duì)照組258.37±15.33、ART組251.50±10.32、TG組249.62±10.08、ART±TG組250.00±10.02明顯高于模型組232.50±16.33，差異有顯著性（P<0.05）；ART組、TG組、ART+TG組大鼠體重與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　 2.各組大鼠足爪容積及關(guān)節(jié)炎指數(shù)的變化：給藥后14天左足足爪容積（ml）、腫脹度

5、（％）、關(guān)節(jié)炎指數(shù)分別為MTX組（0.95±0.36、37.76±5.21、4.75±1.28）、ART組（1.46±0.19、50.38±8.04、5.37±0.51）、TG組（1.65±0.14、48.95±7.96、5.50±0.75）、MTX±ART組（1.2±0.46、35.59±6.83、3.87±0.64）、ART+TG組（0.72±0.22、40.97±7.5、5.25±0.88）與模型組（2.46±0.17、83.72

6、±11.97、12.00±2.20）比較，差異有顯著性（P<0.05）；給藥后14天足爪容積ART組、TG組和MTX+ART組與MTX組比較，差異有顯著性（P<0.05）。給藥14天后腫脹度ART組、TG組與MTX組比較，差異有顯著性（P<0.05）；關(guān)節(jié)炎指數(shù)ART組、TG組和ART+TG組與MTX+ART比較，差異有顯著性（P<0.05）。
　　 3.各組大鼠血清IL-1β、TNF-α、RANKL、OPG水平的比較：模型組大

7、鼠血清IL-1β（pg/ml）、TNF-α（pg/ml）、RANKL（pg/ml）、OPG（ng/ml）水平及RANKL/OPG比率分別為（75.39±15.38、52.91±31.36、70.0±17.63、153.07±38.70、0.47±0.13），顯著高于正常對(duì)照組（15.19±3.55、15.26±2.95、15.58±2.3、83.69±10.45、0.19±0.04），差異有顯著性（P<0.05）；IL-1β、TNF-α

8、、RANKL水平及RANKL/OPG比率分別為MTX組（10.61±5.11、11.15±3.30、12.41±5.02、0.12±0.08）、ART組（29.76±7.71、29.55±13.25、33.12±9.68、0.23±0.10）、TG組（31.61±8.44、26.49±9.87、26.81±9.30、0.18±0.08）、MTX+ART組（8.65±2.48、9.63±2.29、10.03±4.48、0.10±0.03）

9、、ART+TG組（18.61±6.81、20.91±9.98、23.39±7.1、0.15±0.04）均較模型組減少（P<0.05），MTX+ART組差異最明顯。血清IL-1β、TNF-α水平MTX組、ART+TG組與正常對(duì)照組差異無(wú)顯著性（P>0.05）：MTX+ART組、ART+TG組與MTX組差異無(wú)顯著性（P>0.05）。血清RANKL水平MTX+ART組和MTX組與正常對(duì)照組差異無(wú)顯著性（P>0.05）。血清OPG水平MTX組1

10、23.11±10.27、ART組147.56±35.13、 TG組152.57±22.69、 MTX+ART組152.47±21.87、ART±TG組159.20±21.44均較對(duì)照組增加（P<0.05），ART+TG組差異最明顯。
　　 4.各組大鼠關(guān)節(jié)病理積分的比較：病理結(jié)果顯示，模型組：滑膜有不同程度的充血、水腫及炎細(xì)胞浸潤(rùn)；滑膜層次增多（可達(dá)6層）、排列紊亂，有的滑膜向關(guān)節(jié)腔內(nèi)呈現(xiàn)絨毛狀增生，出現(xiàn)較明顯的關(guān)節(jié)軟骨破壞、纖

11、維化；有的還出現(xiàn)多核巨細(xì)胞浸潤(rùn)。各用藥組光鏡下病理改變（滑膜組織增生，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，軟骨破壞程度等）均較模型組減輕。
　　 病理積分模型組2.1±0.36、MTX組1.15±0.30、ART組1.55±0.42、TG組1.69±0.67、MTX+ART組0.83±0.29、ART+TG組1.41±0.56與對(duì)照組0.12±0.23比較有明顯差異（P<0.05）。MTX組、ART組、TG組、MTX+ART組、ART+TG組與模型組比

12、較有明顯差異（P<0.05）。MTX+ART組與MTX組比較有明顯差異（P<0.05）。
　　 5.各組大鼠滑膜組織OPG和RANKL表達(dá)：正常對(duì)照組大鼠滑膜細(xì)胞層及滑膜下層中RANKL、OPG陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)及RANKL/OPG比率分別為（0.06±0.01、0.05±0.01、1.2±0.20）；模型組RANKL、OPG陽(yáng)性密度及RANKL/OPG比率（0.39±0.06、0.19±0.02、2.05±0.60）明顯高于正常對(duì)照

13、組，與正常組比較有顯著性差異（P<0.05）；RANKL、OPG陽(yáng)性密度表達(dá)MTX組（0.18±0.01、0.12±0.02）、MTX+ART組（0.15±0.02、0.11±0.01）、ART+TG組（0.18±0.02、0.12±0.03）與模型組比較有明顯差異（P<0.05）。RANKL陽(yáng)性密度TG組0.23±0.04與ART+TG組0.18±0.02比較，差異有顯著性（P<0.05）；OPG陽(yáng)性密度ART組0.15±0.02與A

14、RT+TG組0.12±0.03比較，差異有顯著性（P<0.05）；RANKL/OPG比率MTX組1.5±0.1、ART組1.4±0.3、TG組1.64±0.26、MTX+ART組1.36±0.40、ART+TG組1.5±0.13較模型組降低，差異有顯著性（P<0.05），MTX+ART組最低。
　　 結(jié)論：
　　 1.青蒿琥酯及其與雷公藤多苷或與甲氨蝶呤配伍均可明顯降低AA大鼠足爪容積、關(guān)節(jié)炎指數(shù)和血清炎性細(xì)胞因子（TN