產(chǎn)抗TMV活性物質(zhì)鴉膽子內(nèi)生真菌的分離、鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、本論文以傳統(tǒng)中藥植物鴉膽子為材料，對(duì)其不同器官中的內(nèi)生真菌進(jìn)行分離，對(duì)分離到的內(nèi)生真菌通過(guò)液體搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，獲得相應(yīng)的代謝產(chǎn)物，以煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus, TMV）為靶標(biāo)，對(duì)各菌株次生代謝產(chǎn)物的抗TMV活性進(jìn)行測(cè)定，篩選出對(duì)TMV侵染和增殖均有抑制作用的菌株，并對(duì)該菌株進(jìn)行鑒定，優(yōu)化菌株產(chǎn)活性物質(zhì)的發(fā)酵條件，分離、純化菌株代謝產(chǎn)物中抗TMV活性物質(zhì)，主要結(jié)果如下：
　　從鴉膽子的根、莖、葉和花中共分

2、離到內(nèi)生真菌138株，其中根中分離到38株，從莖中分離到45株，葉子中45株，花中10株。將138株真菌在25℃、120 r/min的條件下液體搖瓶發(fā)酵后，采用圓葉片法對(duì)內(nèi)生真菌發(fā)酵液粗提物抑制TMV增殖活性進(jìn)行篩選。結(jié)果表明，其中39株內(nèi)生真菌的發(fā)酵液提取物在1 mg/mL濃度下抑制TMV增殖活性，達(dá)50％以上，菌株R11的抑制效果最好，抑制率可達(dá)75.4%。
　　對(duì)TMV增殖抑制率達(dá)50%以上的39株菌株發(fā)酵提取物，采用半葉枯

3、斑法測(cè)定其抑制TMV侵染活性，每株菌重復(fù)5次，結(jié)果表明，有25株內(nèi)生真菌的發(fā)酵液提取物在1 mg/mL濃度時(shí)，對(duì)TMV侵染抑制率達(dá)80%以上?；钚宰詈玫哪苓_(dá)到100%。
　　采用形態(tài)學(xué)鑒定和ITS序列測(cè)定，將對(duì)TMV侵染和增殖抑制效果最好的菌株R11鑒定為曲霉屬、黑曲霉菌。
　　通過(guò)發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選實(shí)驗(yàn)，選用沙氏培養(yǎng)基作為發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化。經(jīng)單因素優(yōu)化試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，確定了R11產(chǎn)抗TMV活性物質(zhì)的最佳發(fā)酵條件為，碳源

4、蔗糖30 g/L，氮源酵母粉15 g/L, CaC121.5 g/L、發(fā)酵時(shí)間15 d,溫度28℃，125 r/min，初始 pH值6，接種量15%，裝瓶量250 mL的三角瓶120 mL。發(fā)酵優(yōu)化后的發(fā)酵液粗提物在1 mg/mL時(shí)，抗侵染抑制率為97.26%,較優(yōu)化前提高了2.1%，抗增殖抑制率為82.91%，較優(yōu)化前提高了7.56%。通過(guò)發(fā)酵優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，我們提高了菌株R11抑制TMV病毒活性物質(zhì)的能力，為該菌株的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)奠定了研究基