兩種新的方法檢測散發(fā)性卵巢癌基因突變方法的應(yīng)用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、復(fù)旦大學博士后學位論文兩種新的方法檢測散發(fā)性卵巢癌基因突變方法的應(yīng)用姓名：杜明申請學位級別：博士后專業(yè)：婦產(chǎn)科指導(dǎo)教師：豐有吉20040301VALIDATIoNoFTWONEWMETHODSFoRMUTATIONDETECTIONINSPoRADICoVARIANCANCERObjective：Twolatelydevelopedmethodsformutationdetection，DHPLC(denaturinghighperfo

2、rmanceliquidchromatography)andfddF(fluorescentdideoxyfingerprinting)havebeentestedfortheirsuitabilitybyanalysingheterogeneoustumormatedalMethods：Forcomparisonofbothtechniques50sporadicovariancancers(OC)including18knownp5

3、3mutations(blindstudy)wereexaminedanalysingexons58byDHPLCandbyfddFftotaI200PCRfragments)TheconventionaIddFwasadaptedtoanALFexpresslMDNAsequencingsystemusingCy5labeledpdmersforsingle—strandsequencingreactionwithddGTPorddT

4、TPForDHPLCanalysestheWAVEsystem(Transgenomic)wasusedResults：All18mutationscouldbedetectedbyDHPLCanalysis(sensitivity：100％)withoutanyfalsepositiVe／negatiVeresultswhereas4mutationsweremissedbyfddF(sensitivity：78％)Interpret

5、ationoffddFresultsismoredifficultthereforeahighernumberoffalsepositiveresultswasobtainedWithrespecttotumorheterogeneity(unknownratioofmutant／wildtypeDNA)dilutionofmlDNAbvwfDNArevealedthehighsensitivityofthismethod：5％muta

6、ntDNAaresufficienltoachieveapositiveDHPLCresullandlumorDNAwith／withoutLOH(10ssofheterozygosity)canbeanalyseddirectlyHoweverconfirmingapositiveDHPLCresullbyDNAsequencingiSdif『icullinheterogeneoustumormaterialConclusion：DH

7、PLCisareliablehighthroughputtechniqueformutationdetectioninheterogeneoustumormatedalMutationdetectionbyfddFrevealedonlyasensitivityof78％andalowerspecificityHoweverincontrasttoDHPLCanalysisnoadditionalequipmentisnecessary

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