PtrBAM1的抗寒功能鑒定及其與CBF的互作研究.pdf

1、柑橘是人們日常生活中重要的水果，也是我國重要的經濟樹種;但是不耐低溫成為了其分布的制約因素。枳(Poncirus trifoliata(L.) Raf.)極抗寒，主要作為柑橘種植的砧木。研究枳抗寒的機理對提高柑橘類植物的抗寒性有重要意義。PtrBAM1是枳中編碼一個β-淀粉酶的基因，其同源基因AtBAM3受低溫快速誘導，CBF/DREB途徑是研究得比較透徹的低溫調控路徑;本研究在實驗室已經獲得的PtrBAM1和PtrCBF3轉基因煙草的

2、基礎上對PtrBAM1基因的抗寒功能進行鑒定以及與CBF/DREB途徑的相互關聯(lián)進行分析。
　　1.測定PtrBAM1超表達系和對照系煙草在-4℃處理2.5h下的存活率，發(fā)現(xiàn)超表達系的存活率均為70％左右，顯著高于野生型的37.8％和空載22.3％;枳4℃處理6h后β-淀粉酶活性為2.2U/mgprot高于處理前，麥芽糖含量為13.4μg/mL高于處理前;說明PtrBAM1基因確實與植物的抗寒性相關，并快速響應低溫。亞細胞分析結果

3、表明PtrBAM1基因定位于葉綠體。PtrBAM1啟動子順式作用元件預測也發(fā)現(xiàn)存在多個與光合作用相關的順式作用元件;推測PtrBAM1基因通過調節(jié)光合作用來增強植物的抗寒性。
　　2.通過測定PtrCBF3轉基因系煙草的β-淀粉酶活性和麥芽糖含量，說明PtrBAM1受CBF調控;酵母單雜交和雙螢光素酶活性測定(LUC/REN)證明PtrBAM1基因是CBF的下游基因，主要是和PtrCBF3互作參與抗寒途徑，通過LUC/REN結果推