不同濃度乳鐵蛋白對(duì)原代大鼠成骨細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：
　　觀察不同濃度的乳鐵蛋白（Lactoferrin LF）對(duì)原代大鼠成骨細(xì)胞增殖的影響，探討低濃度乳鐵蛋白（<100ug/ml）及高濃度乳鐵蛋白（>100 ug/ml）與成骨細(xì)胞增值的關(guān)系，為乳鐵蛋白的進(jìn)一步研究提供參考依據(jù)。
　　方法：
　　（1）采用混合酶法從SD乳鼠頭蓋骨中分離原代大鼠成骨細(xì)胞，通過(guò)采用多次“差速貼壁法”對(duì)成骨細(xì)胞進(jìn)行純化。光鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生長(zhǎng)狀況，并用堿性磷酸酶染色及Ⅰ型膠原免

2、疫組化染色鑒定。
　?。?）取第二代成骨細(xì)胞，以3000個(gè)/孔的細(xì)胞數(shù)量種于96孔板，不同濃度乳鐵蛋白干預(yù)成骨細(xì)胞，乳鐵蛋白濃度分別為0.1ug/ml，1ug/ml，10ug/ml，100ug/ml，200ug/ml，400ug/ml，600ug/ml，800ug/ml，1000ug/ml，在1,3,5,7天后分別采用CCK-8法測(cè)定細(xì)胞增殖。
　?。?）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：各實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用x±s表示，應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行

3、統(tǒng)計(jì)分析，各組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA)。P﹤0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　(1)原代培養(yǎng)的細(xì)胞具有成骨細(xì)胞的典型特征，形態(tài)多樣，呈三角形、多邊形、長(zhǎng)梭形等形態(tài)，有長(zhǎng)短不一的突起，可見(jiàn)胞核，并伸有粗大偽足；堿性磷酸酶染色及Ⅰ型膠原免疫組化染色呈陽(yáng)性。
　　(2)CCK-8法結(jié)果顯示：干預(yù)第一天，1ug/ml、10ug/ml、100ug/ml濃度乳鐵蛋白組細(xì)胞增殖均明顯高于對(duì)照

4、組（p<0.01），200 ug/ml、400 ug/ml、600 ug/ml組均低于對(duì)照組（P<0.05）,800ug/ml和1000 ug/ml低于對(duì)照組（P<0.01）。干預(yù)第三天，0.1ug/ml、1 ug/ml組吸光度值高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05），而10ug/ml、100 ug/ml組較對(duì)照組升高，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01），200 ug/ml組吸光度值低于對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）,4

5、00 ug/ml組吸光度值低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），600ug/ml、800 ug/ml和1000 ug/ml組吸光度值低于對(duì)照組，差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。干預(yù)第五天，0.1ug/ml、1ug/ml、10 ug/ml組均高于對(duì)照組(p<0.05），100 ug/ml組明顯高于對(duì)照組（p<0.01），200ug/ml、400ug/ml、600ug/ml、800ug/ml和1000ug/ml組明顯低于對(duì)照組

6、（p<0.01）。干預(yù)第七天，1 ug/ml組明顯高于對(duì)照組（p<0.01），而0.1 ug/ml、10ug/ml、100ug/ml組雖高于對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，200ug/ml、400ug/ml、600ug/ml、800 ug/ml和1000 ug/ml組明顯低于對(duì)照組（p<0.01）。同時(shí)，各干預(yù)組干預(yù)1,3,5,7天，各孔的吸光度值隨著干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)而上升。
　　結(jié)論：
　?。?）采用胰酶和Ⅰ型膠原酶混合酶消化法體外