黃芪注射液對大鼠脊髓缺血再灌注損傷的保護作用及機理研究.pdf

1、目的：通過動物實驗研究黃芪注射液對大鼠脊髓缺血再灌注模型是否具有保護作用以及保護作用的機理。
　　方法：采用Zivin法，建立大鼠脊髓缺血再灌注模型。33只SD大鼠隨機分為假手術組(A組，n=3)、缺血再灌注組(B組，n=15)、黃芪組（C組，n=15)。A組只進行麻醉和開腹手術操作，不阻斷腹主動脈，麻醉前腹腔給予0.9％氯化鈉注射液；B組麻醉前腹腔給予0.9%氯化鈉注射液，麻醉后阻斷腹主動脈32分鐘后再灌注；C組麻醉前30分鐘腹

2、腔注射黃芪注射液，麻醉后阻斷腹主動脈32分鐘后再灌注。再灌注2h、8h、12h、24h、48h后分別對三組動物進行后肢運動功能評分（BBB法）。并于各個時間點分別將三組動物麻醉后，下腔靜脈取血4mL并切取L2-4脊髓組織進行血清NSE、脊髓組織HE染色、測定脊髓組織中Ca2+濃度、AQP4表達及凋亡指數(shù)。
　　結果：1、大鼠后肢神經(jīng)功能BBB評分結果：模型組和黃芪組動物清醒后均出現(xiàn)不同程度后肢運動障礙，模型組和黃芪組實驗動物后肢神

3、經(jīng)功能評分顯著低于空白組(P<0.05)。隨著缺血后再灌注時間延長，兩組動物后肢運動功能均出現(xiàn)恢復，其中黃芪組動物后肢運動功能恢復速度較快，而模型組動物后肢運動功能恢復較慢，而且在48小時后實驗動物尾部功能仍不能恢復，處于垂尾狀態(tài)，在各時間點黃芪組后肢神經(jīng)功能BBB評分顯著高于模型組(P<0.05)。
　　2、脊髓組織HE染色結果：假手術組：400倍光鏡視野中脊髓組織結構清晰，未見白細胞浸潤、水腫等。神經(jīng)元細胞輪廓清晰，胞核、尼氏

4、體正常。模型組：脊髓組織水腫，結構不清晰，有大量白細胞浸潤，有少量紅細胞滲出，同時可見膠質細胞增生；大量神經(jīng)元細胞退變、壞死，組織內可見空泡形成；神經(jīng)元細胞核固縮，尼氏體消失。黃芪組：病理變化在相應時間點明顯好于模型組，但也仍可見組織水腫，少量白細胞浸潤，未見紅細胞滲出，膠質細胞輕度增生；組織內有空泡形成，但仍可見較多正常神經(jīng)元殘存；神經(jīng)元細胞同樣存在核固縮，尼氏體消失等變化。
　　3、大鼠血清NSE濃度檢測結果：模型組和黃芪組兩

5、組大鼠脊髓缺血再灌注后血清NSE濃度明顯高于空白組(P<0.01)；黃芪組在缺血再灌注后2h、8h、12h、24h四個時間點血清 NSE濃度明顯低于模型組(P<0.01)，而黃芪組在缺血再灌注后48h血清NSE濃度高于模型組(P<0.01)。模型組在缺血再灌注后12h可見血清NSE濃度達高峰，而后逐漸回落；黃芪組在缺血再灌注后24h可見血清NSE濃度達高峰，而后逐漸回落，但回落趨勢慢于模型組，并于缺血再灌注48小時血清NSE含量高于模型

6、組。與模型組相比，黃芪組缺血再灌注后血清 NSE含量峰值低于模型組，波動幅度小于模型組。
　　4、大鼠脊髓組織Ca2+濃度檢測結果：B、C兩組脊髓組織中Ca2+濃度在各個時間點均高于A組（P<0.01），在缺血再灌注后2h、8h、12h、24h四個時間點，C組（黃芪組）脊髓組織中Ca2+濃度低于B組（模型組），但在缺血再灌注后48h，C組（黃芪組）脊髓組織中Ca2+濃度高于B組（模型組）；其中B組在再灌注12h后達到峰值，其后逐漸

7、回落，而C組在再灌注2h逐漸上升，在再灌注后48h達到峰值，但C組峰值低于B組峰值。
　　5、蛋白免疫印跡法檢測大鼠脊髓組織 AQP4表達：模型組大鼠脊髓組織中AQP4在缺血再灌注后2-48小時5個時間點表達呈上升趨勢，在48h點達到最高峰；黃芪組大鼠脊髓組織中AQP4在缺血再灌注后8小時達到高峰，隨后逐漸降低；但模型組、黃芪組兩組脊髓組織中AQP4表達均高于空白組（P<0.01），其中黃芪組在各個時間點 AQP4表達均低于模型組

8、（P<0.01）。假手術組大鼠脊髓組織中AQP4表達在術后呈下降趨勢，并于術后12h后基本保持穩(wěn)定。
　　6、原位末端標記法檢測大鼠脊髓中凋亡細胞結果：空白組切片顯示400倍視野內可見神經(jīng)元細胞藍染，細胞形態(tài)正常，細胞核結構清晰，胞質中尼氏體存在，少量細胞核為棕黃色凋亡細胞；模型組切片400倍視野可見部分神經(jīng)元細胞形態(tài)尚存，但細胞核明顯染為棕黃色(凋亡早期)，細胞質內尼氏體消失，視野中也可見到明顯為棕黃色的凋亡小體(凋亡晚期)，藍

9、染的正常細胞較少見；黃芪組切片400倍視野下也可細胞核黃染的凋亡細胞，但視野內還可見大量藍染的正常神經(jīng)元細胞。模型組、黃芪組兩組切片在400倍視野中，模型組視野內凋亡細胞明顯多于黃芪組。三組凋亡指數(shù)統(tǒng)計結果：模型組、黃芪組兩組脊髓組織中凋亡指數(shù)均高于空白組（P<0.01），但各時間點黃芪組脊髓組織凋亡指數(shù)低于模型組（P<0.01）。
　　結論：1、黃芪注射液對大鼠脊髓缺血再灌注損傷有明顯保護作用。
　　2、黃芪注射液可通過降