土貝母皂苷、苷甲抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用的研究.pdf

1、背景和目的：土貝母[Bolbostemma paniculatum(Maxim.) Franquet (Cucurbitaceae)]是一種傳統(tǒng)中藥。我們以前的研究結(jié)果已證實(shí)從土貝母塊莖中分離得到的土貝母皂苷（以下簡稱皂苷）、苷甲（以下簡稱苷甲）有強(qiáng)抗腫瘤效果和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用。本研究旨在探討皂苷、苷甲對腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移能力的影響，并對其可能機(jī)理進(jìn)行研究。 方法： 1． MTT法檢測皂苷、苷甲對人高轉(zhuǎn)移巨細(xì)胞肺癌PG

2、CL3細(xì)胞（以下簡稱PGCL3細(xì)胞）生長的影響。 2． 相關(guān)基底膜成分分析試驗(yàn)、重組基底膜侵襲試驗(yàn)、Transwell室趨化運(yùn)動(dòng)模型研究皂苷、苷甲對PGCL3細(xì)胞的粘附、侵襲和運(yùn)動(dòng)能力的影響。 3． 明膠酶譜法檢測皂苷、苷甲對PGCL3細(xì)胞Ⅳ型膠原酶的分泌量及Ⅳ型膠原酶活性的影響。 4． Lewis肺癌裸鼠移植瘤轉(zhuǎn)移模型檢測苷甲對腫瘤體內(nèi)生長與轉(zhuǎn)移能力的影響。 5． B16黑色素瘤轉(zhuǎn)移模型檢測苷甲對腫瘤體

3、內(nèi)轉(zhuǎn)移能力的影響。 6． 免疫組化法檢測苷甲對LLC細(xì)胞轉(zhuǎn)移基因CD44v6、c-erbB2、mn23-H1表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1. 皂苷、苷甲明顯抑制PGCL3細(xì)胞的生長，且呈劑量依賴關(guān)系。皂苷作用PGCL3細(xì)胞24、48、72 h的IC50值分別為16.8、14.6、14.4 μmol·L-1；苷甲作用PGCL3細(xì)胞24、48、72 h的IC50值分別為15.7、14.2、13.3 μmol·L-1。

4、 2. 皂苷1.25、2.50、5.00 μmol·L-1 處理PGCL3細(xì)胞24 h，對PGCL3細(xì)胞侵襲能力的抑制率分別為26.5％、35.7％、50.7％；苷甲1.25、2.50、5.00 μmol·L-1處理PGCL3細(xì)胞24 h，對PGCL3細(xì)胞侵襲能力的抑制率分別為28.7％、41.0％、57.5％。 3. 皂苷1.25、2.50、5.00 μmol·L-1 處理PGCL3細(xì)胞24 h，對PGCL3細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的抑

5、制率分別為19.2％、29.1％、45.8％；苷甲1.25、2.50、5.00 μmol·L-1處理PGCL3細(xì)胞24 h，對PGCL3細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的抑制率分別為21.6％、35.2％、53.7％。 4. 皂苷、苷甲1.25、2.50、5.00 μmol·L-1處理PGCL3細(xì)胞24 h，降低PGCL3細(xì)胞對層粘連蛋白、纖維粘連蛋白的粘附率。 5. 皂苷、苷甲降低PGCL3細(xì)胞Ⅳ型膠原酶的分泌量及其活性，且呈一定的劑量依

6、賴關(guān)系。 6. BALB/c裸小鼠腹腔注射苷甲（1.5 μmol / kg ·d和2.3 μmol / kg ·d）14天，對裸鼠的體重?zé)o明顯的影響。 7. BALB/c裸小鼠背部皮下接種LLC細(xì)胞，可100％形成原發(fā)瘤，并發(fā)生自發(fā)性肝轉(zhuǎn)移。BALB/c裸小鼠尾靜脈接種B16細(xì)胞，同時(shí)發(fā)生肝轉(zhuǎn)移與肺轉(zhuǎn)移。 8. 苷甲可明顯抑制原發(fā)瘤的生長。苷甲1.5 μmol / kg ·d和2.3 μmol / kg ·d對原

7、發(fā)瘤生長的抑制率分別為49.6％和58.0％。 9. 苷甲1.5 μmol/kg·d和2.3 μmol/kg·d對Lewis肺癌體內(nèi)自發(fā)性肝轉(zhuǎn)移抑制率分別為46.3％和52.0％；對B16黑色素瘤細(xì)胞體內(nèi)實(shí)驗(yàn)性肝轉(zhuǎn)移抑制率分別為29.7％和45.3％；對B16黑色素瘤細(xì)胞體內(nèi)實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移抑制率分別為68.8％和82.8％。 10. 苷甲作用后，LLC細(xì)胞轉(zhuǎn)移抑制基因nm23-H1的表達(dá)升高，轉(zhuǎn)移促進(jìn)基因CD44v6和c-

8、erbB2的表達(dá)降低。 結(jié)論： 1. 皂苷、苷甲可抑制PGCL3細(xì)胞體外粘附、侵襲和遷移能力,且呈劑量依賴性。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在低濃度條件下（≤5μmol·L-1 ） 苷甲抗腫瘤細(xì)胞體外侵襲能力比皂苷稍強(qiáng)。 2. 皂苷、苷甲對PGCL3細(xì)胞粘附和侵襲和遷移能力的影響與其降低PGCL3細(xì)胞Ⅳ型膠原酶的分泌量及其活性相關(guān)。 3. 苷甲對BALB/c裸小鼠無明顯的毒副作用。 4. 苷甲可明顯抑制BAL