膜過濾分離腫瘤細(xì)胞技術(shù)研究.pdf

1、目的:利用體外細(xì)胞實驗、動物實驗及臨床實驗來對膜過濾分離腫瘤細(xì)胞技術(shù)（Isolation by size of epithelial tumor cells，ISET）進(jìn)行系統(tǒng)性研究，目的是為了建立起一整套使用ISET技術(shù)在血液循環(huán)過程中檢測、篩選、分離循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells，CTC)并進(jìn)行深入分析的技術(shù)方法，并為進(jìn)一步的臨床試驗打下基礎(chǔ)。
　　研究方法:1.利用帶EGFP報告基因的H520肺

2、鱗癌細(xì)胞株，構(gòu)建ISET技術(shù)體外細(xì)胞實驗方法及技術(shù)流程，并觀察ISET技術(shù)在生理鹽水和外周血這兩種不同介質(zhì)中的腫瘤細(xì)胞回收率及敏感性、特異性。2.建立腫瘤細(xì)胞血行轉(zhuǎn)移動物模型，利用ISET技術(shù)對動物外周血進(jìn)行檢測，尋找轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞。3.ISET外周血篩查裝置的設(shè)計和建立，以及對96例肺部疾病患者外周血進(jìn)行篩查，觀察ISET技術(shù)應(yīng)用于臨床檢測的敏感性和特異性，并對特殊病例進(jìn)行外周血CTC的持續(xù)監(jiān)視。4.ISET血液循環(huán)系統(tǒng)的設(shè)計、建立，

3、應(yīng)用于VX2兔腫瘤細(xì)胞血行轉(zhuǎn)移模型，對比ISET外周血篩查裝置和血液循環(huán)系統(tǒng)的敏感性，驗證ISET血液循環(huán)系統(tǒng)的安全性。
　　結(jié)果:1.成功將pEGFP-N3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入H520腫瘤細(xì)胞中，體外實驗發(fā)現(xiàn)ISET技術(shù)在生理鹽水和外周血這兩種不同介質(zhì)中的腫瘤細(xì)胞回收率分別為97.57±1.33％、79.53±2.63％，敏感性測試中基本達(dá)到了1ml外周血中檢測到1個腫瘤細(xì)胞的敏感性，由于陰性對照組中未發(fā)現(xiàn)目標(biāo)細(xì)胞，表明ISET技術(shù)有很高

4、的特異性。2.分別建立NOD-SCID小鼠腫瘤細(xì)胞血行轉(zhuǎn)移模型和VX2兔腫瘤細(xì)胞血行轉(zhuǎn)移模型，利用ISET技術(shù)在3只NOD-SCID荷瘤鼠體內(nèi)檢測出CTC，在17只VX2荷瘤兔中有3只實驗兔檢測出CTC。3.設(shè)計并建立ISET外周血篩查裝置并應(yīng)用于96例肺部疾病患者，腫瘤組CTC的檢出率為2.99％，非腫瘤組CTC的檢出率為0.00％。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組CTC的檢出率為50.00％，顯著高于未遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組CTC的檢出率0.00％(P＜0.05)。

5、4.對結(jié)腸癌肺、骨轉(zhuǎn)移患者進(jìn)行外周血持續(xù)監(jiān)測，治療后期發(fā)現(xiàn)其外周血中開始持續(xù)存在CTC及癌栓。5.設(shè)計并建立ISET血液循環(huán)系統(tǒng)并應(yīng)用于VX2兔腫瘤細(xì)胞血行轉(zhuǎn)移模型，發(fā)現(xiàn)利用ISET外周血篩查裝置的CTC的檢出率為17.65％，顯著低于利用ISET血液循環(huán)系統(tǒng)的檢出率82.35％(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.ISET技術(shù)在體外實驗中有較高的敏感性和特異性，且實驗方法簡單，不依賴任何大型設(shè)備，實驗結(jié)果穩(wěn)定，可重復(fù)性強(qiáng)。2.在國際

6、上首次利用ISET技術(shù)在腫瘤細(xì)胞血行轉(zhuǎn)移動物模型中檢測到CTC，具有極高的特異性。3.ISET外周血篩查裝置適用于臨床篩查CTC且方便組裝便于攜帶。4.ISET技術(shù)在臨床實驗中表現(xiàn)出極高的特異性，但是敏感性不佳。5.ISET技術(shù)在療效監(jiān)視、評估預(yù)后以及在腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制研究方面有巨大潛力。6.在國際上首次設(shè)計并建立ISET血液循環(huán)系統(tǒng)，可以顯著提高ISET技術(shù)敏感性，并且直接減少循環(huán)血液中存在的CTC數(shù)量。
　　上述技術(shù)、方法的實施對